ЭлБиб

Секция 2: Зоологическая безопасность и подготовка кадров

цепной реакции (ПЦР) и его специфическая детекция с помощью электрофореза в

агарозном геле. Для этого применяли рестрикционный анализ продуктов

амплификации, полученных с использованием подобранных нами праймеров,

комплементарных последовательности

35S

промотора из вируса мозаики цветной

капусты (см. этап 2.2). Для оценки длины полноразмерного ПЦР-фрагмента и

продуктов его рестрикции использовали маркер молекулярного веса

GeneRuler

50 bp DNA Ladder (Fermentas,

Эстония). Матрицей для ПЦР служила ДНК из

генетически-модифицированной сои линии

40-3-2

(ДНК-стандарт производства

фирмы

Fluka,

Швейцария).

В ходе экспериментальной работы были апробированы 12 различных праймеров

попарно в 36-и различных комбинациях. Результаты оценивали по общепринятым

показателям специфичности и воспроизводимости. Сразу селектировали только те

пары праймеров, которые позволяют амплифицировать только один ПЦР-продукт

ожидаемого размера, соответствующего целевому фрагменту 35S промотора из вируса

мозаики цветной капусты. Полученные фрагменты подвергали обработке тремя

различными рестриктазами. Ожидаемые размеры рестрикционных фрагментов

определяли в соответствии с расположением строго специфических сайтов

рестрикции на последовательности нуклеотидов целевого фрагмента 35S

промотора. Если реальные размеры рестрикционных фрагментов в точности

соответствовали ожидаемым, мы считали, что в ходе амплификации нами был

получены копии только целевого фрагмента, а значит, специфичность ПЦР в таких

случаях составляет 100%. По окончании предварительных экспериментов, нами

была отобрана только одна пара праймеров, позволяющая со 100%-ной

специфичностью

амплифицировать

целевой

фрагмент

35S

промотора.

Амплифицированный фрагмент был секвенирован, после чего были получены

прямое и окончательное доказательство его полной идентичности с

последовательностью 35S промотора из вируса мозаики цветной капусты.Таким

образом, испытание ПЦР-метода для выявления 35S промотора в качестве маркера

трансгеноза, подбор оптимальной пары праймеров для амплификации целевого

фрагмента 35S промотора со 100%-ной специфичностью, доказательство вполне

приемлемой надежности получаемых с её помощью результатов.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИДОВ ДРОЖЖЕЙ ПРИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМ

КОНТРОЛЕ ТВОРОГА

И. И. Шаломскене, И. А. Мачионене

Литовский пищевой институт

(Литовская Республика)

Дрожжи широко распространены в природе и в окружающей человека среде. В

молочные продукты они могут попасть с оборудования, с рук и одежды рабочих, из

воздуха, сыворотки. Развитие дрожжей в пищевых продуктах может вызвать их порчу-

вспучивание, изменение вкуса, запаха, консистенции. Наибольшие проблемы вызывает

присутствие дрожжей в кисломолочных продуктах и сычужных сырах. При контроле

качества молочных продуктов обычно определяют общее количество дрожжей,

подтверждая их наличие методом микроскопирования. Определение видов изолятов

дрожжей не всегда обязательно, однако представляет много важной информации о

микробной экологии продукта, свойствах дрожжей и источниках заражения,

способствует пониманию условий роста этих микроорганизмов.

Электронная Научная СельскоХ зяйственная Библиотека