34 / 60
В
иноделие
и
иноградарство
5/2011
32
виноградарство
Особенности клонального
микроразмножения
сорта
Крестовский
Н. П. Дорошенко
, д-р с.‑х. наук;
А. С. Куприкова
, аспирант
Всероссийский научно-исследовательский институт виноградарства и виноделия им. Я. И. Потапенко
использованием ценных абориген-
ных сортов винограда связана воз-
можность производства высокока-
чественных и уникальных вин, прославив-
ших виноградарство и виноделие Дона [1].
Неоспорима их значимость в селекционном
процессе [2], так как местные сорта поми-
мо высокого качества урожая обладают
ценными агробиологическими свойствами.
На Дону сформирована группа столовых и
универсальных сортов— естественных гиб
ридов столовых восточных и аборигенных
донских сортов. Один из них —малоизвест-
ный донской универсальный сорт позднего
срока созревания
Крестовский
, встречаю-
щийся в виде единичных кустов на старых
донских виноградниках. Его урожай исполь-
зуют для потребления в свежем виде и при-
готовления ординарных столовых вин. Сорт
отличается высокой силой роста, хорошим
вызреванием лоз. Следует отметить, что в
коллекции института остался единственный
куст с признаками короткоузлия, заражен-
ный бактериальным раком.
Цель работы
— оздоровить растения
сорта
Крестовский
в культуре тканей и орга-
нов при помощи культуры апикальных мери-
стем и хемотерапии для получения растений,
свободных от хронических заболеваний, со-
хранения растений в коллекции
in vitro
и на
базисном маточнике.
Для проведения хемотерапии использова-
ли салициловую кислоту, которую некоторые
авторы относят к новому классу фитогормо-
нов. Она способна поддерживать целостность
мембранных структур клеток при воздействии
стрессовых факторов [3]. Доказано [4], что в
ее присутствии происходит ингибирование
распространения вируса ВТМ, одной из при-
чин которого является снижение проводимо-
сти плазмодесм и межклеточного транспорта
вируса.
М.Т. Упадышев, А.Д. Петрова
[5, 6] в
процессе хемотерапии выявили антивирус-
ную активность салициловой кислоты в отно-
шении вирусов различной природы у ягодных
и плодовых культур.
По данным наших исследований [7], до-
бавление салициловой кислоты в состав пи-
тательной среды на этапе ввода в культуру
in vitro
подвоев винограда способствует луч-
шей приживаемости меристем, новообразо-
ванию узлов и побегов на этапе собственно
микроразмножения.
Непосредственное отношение к культи-
вированию растений
in vitro
имеет проб
лема контаминации. Питательные среды
служат отличным субстратом для развития
бактериальной и грибной микрофлоры, что
приводит к гибели большого количества рас-
тений, ухудшению их ризогенеза, снижению
ростовых показателей и качественных ха-
С
рактеристик.
Для деконтаминации исполь-
зуют антимикоплазменные антибиотики
,
в частности
цефотаксим
, который также
стимулирует морфогенетический процесс и
увеличивает частоту регенерации растений,
что сокращает период культивирования тка-
ней
in vitro
[8].
На основании вышеизложенного сали-
циловую кислоту и цефотаксим включили в
программу исследований.
Методика.
Все исследования проводили
по общепринятым в биотехнологии методи-
кам на питательной среде Мурасиге и Скуга,
модифицированной для каждого этапа мик
роразмножения.
Вводили в культуру на твердой питатель-
ной среде Мурасиге и Скуга 17 июля. На
каждый вариант выделяли 28 меристем.
Цефотаксим растворяли в стерильной во-
де и добавляли в проавтоклавированную
и охлажденную до 45 °С питательную среду
непосредственно перед выделением мери-
стем. На этапе микрочеренкования концент
рацию антибиотика в среде варьировали от
250 до 550 мл/л.
УДК 634.83:581.143.316
Ключевые слова:
аборигенный сорт
Крестовский, меристемы, питательная
среда, регенерация, приживаемость,
оздоровление
Препарат, мг/л
Число меристем
Гибель Отсутствие
развития
Мелкие
до 1 мм
Средние
1–3 мм
Крупные
более
3 мм
С развер-
тыванием
листьев
Высаженные
Через 20 сут после изолирования
Контроль
1
— 8
4
15
— 15
Салициловая кислота (1,4) — 11
5
9
3
— 3
Цефотаксим (200)
1
5
2
6
14
— 14
Через 30 сут после изолирования
Контроль
1
— 2
3
— 7
7
Салициловая кислота (1,4)
1
— 7
4
4
9
9
Цефотаксим (200)
4
— 4
1
— 5
5
Таблица 1
Препарат, мг/л
Приживаемость
меристем, %
Число срезанных в пассаже побегов
1
2
3
4
5
Всего
Контроль
92,9
11
11
1
1
15
39
Салициловая кислота (1,4)
82,1
1
3
3
1
0
8
Цефотаксим (200)
70,6
16
23
0
7
8
54
Таблица 2
Препарат, мг/л
Продолжи-
тельность
этапа, сут
Число пассажей
Число срезанных побегов
всего продуктивные всего
на
меристему
на пассаж
всего продуктивные
Контроль
112
5
5
39
1,4
7,8
7,8
Салициловая кислота (1,4)
112
5
4
8
0,3
1,6
2,0
Цефотаксим (200)
112
5
4
54
1,9
10,8
13,5
Таблица 3
Препарат, мг/л
Число листьев
Листья, %
Корни, %
нормальные шиповатые нормальные
тонкие
Контроль
11,9
—
100,0
70,0
30,0
Салициловая кислота (1,4)
22,5
50,0
50,0
100,0
0
Цефотаксим (200)
10,8
70,0
30,0
80,0
20,0
Всего по опыту
15,1
40,0
60,0
80,0
20,0
Таблица 4
Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека