ЭлБиб

рованным: методом У. Ota, К. Yamada, содержание белка в препарате модифици

рованным методом Lowry. Ковалентную иммобилизацию липазы на аиишшге АВ-

»7-2П осуществляли модифицированным глутаральдегидным истодом. Опреде

ление количества SH-групп проводили по методу Thannhatiser et al.

Каталитическая активность растворимой лнпазм составляет 67 ед/мг белка,

содержание белка - 270 мг/r препарата. Иммобилизованный фермент сохраняет

активности по сравнению с нативной формой липазы, содержание белка -

2.5 мг/r носителя.

Исследована зависимость каталитической активности растворимой и иммо

билизованной липазы от температуры гидролиза. В обоих случая* кривые зависи

мости A(t) имеют классическую колоколообразную форму . Растворимый фермент

обладает наибольшей каталитической активностью при температуре 30°С, При

иммобилизации температурный оптимум сдвигается вправо на К)°С. Это позволя

ет нам сделать заключение, что иммобилизованный фермент более термостаби

лен. ' '

Мы изучили зависимость каталитической активности свободной и иммоби

лизованной липазы от значения pH гидролиза. Кривые Л(рН) имеют колоколооб-

разнуго форму. Оптимальное значение pH для растворимого фермента составляет

6.5 единиц. При иммобилизации липазы оптимум pH сдвигаегся вправо на 0,5

единиц и составляет 7,0 единиц. Эти данные позволяют нам сделать вывод, что

при ковалентном связывании липазы с анионитом АВ-17-2П происходят измене

ния в состоянии ионизации отдельных компонентов ферментативной реакции.

Для исследования влияния ковалентной иммобилизации на нативную кон

формацию липазы был проведен сравнительный анализ ЙК-спсюров свободного

и иммобилизованного фермента и рассчитано процентное содержание различных

типов вторичной структуры липазы. Незначительное уменьшение содержания а —

спиралей и увеличение числа неупорядоченных структур свидетельствует о сла

494

Научная электронная библиотека ЦНСХБ