47 / 52
ТЕХНОЛОГИИ ЗАГОТОВКИ, ХРАНЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОРМОВ
www.kormoproizvodstvo.ruͪКормопроизводствоͫ № 7, 2014
45
висимости уровня флуоресценции от номера цик-
ла. В наших исследованиях использовался порого-
вый метод анализа. Он предполагает определение
значения порогового цикла (С
q
), показывающего
момент в ходе реакции, когда количество ДНК в
реакционной пробирке (соответственно и флуорес-
центный сигнал) достигает одинаковой для всех об-
разцов пороговой величины. Следовательно, зна-
чение С
q
обратно пропорционально содержанию
специфической ДНК в реакционной смеси.
Для анализа заражённости с помощью ПЦР нами
были использованы четыре пары праймеров, ис-
пользуемых ООО «АгроДиагностика», обеспечи-
вающих детекцию групп видов основных возбуди-
телей фузариоза в соответствии со спектрами про-
дуцируемых ими микотоксинов (Stakheev, 2011):
– продуценты трихотеценовых токсинов типа А
(
F. sporotrichioides
,
F. langsethiae
);
– продуценты трихотеценовых токсинов типа В
(
F. graminearum
,
F. culmorum
,
F. cerealis
);
– смешанный трихотеценовый хемотип (
F. poae
);
– продуценты энниатинов и монилиформи-
на (
F. avenaceum
,
F. tricinctum
,
F.
acuminatum
,
F. torulosum
).
3. Результаты ПЦР 14 анализируемых образцов
К+— положительный контроль, К– — отрицательный контроль (в скобках приведено значение С
q сред.
)
№
Образец
С
q сред
,
праймеры к
F. Grami-
nearum,
F. Culmorum,
F. cerealis
С
q сред
,
праймеры к
F. Sporotri-
chioides,
F. langsethiae
С
q сред
,
праймеры к
F. poae
С
q сред
,
праймеры к
F. Avenaceum,
F. Tricinctum,
F. Acuminatum,
F. torulosum
1 Комбикорм для овец гранулированный 1
–
–
–
+ (24,5)
2 Комбикорм для овец гранулированный 2
–
–
+ (29,2)
+ (27,8)
3 Комбикорм для овец рассыпной
–
–
–
–
4 Комбикорм для кроликов
–
+ (33,9)
+ (31,5)
+ (26,6)
5 Комбикорм для кур
–
+ (29,4)
+ (26,3)
+ (27,0)
6 Зерно кукурузы дроблёное
–
+ (32,4)
–
+ (27,0)
7 Жмых подсолнечный
–
–
–
+ (27,0)
8 Зерно овса 1
–
–
+ (30,0)
+ (28,0)
9 Зерно овса 2
–
+ (34,1)
+ (30,0)
+ (26,5)
10 Зерно ячменя
–
+ (34,0)
+ (28,0)
+ (25,0)
11 Зерно пшеницы 1
–
–
–
+ (26,0)
12 Зерно пшеницы 2
–
–
–
–
13 Кукуруза
–
+ (35,0)
–
–
14 Горох
–
–
–
+ (29,5)
15 К+
+ (23,8)
+ (19,3)
+ (20,0)
+ (20,9)
16 К–
–
–
–
–
2. Концентрации ДНК, выделенной
из анализируемых образцов
Образец Концентрация
ДНК, нг/мкл Образец Концентрация
ДНК, нг/мкл
1 (1)
1 (2)
200
110
8 (1)
8 (2)
1300
1400
2 (1)
2 (2)
2100
1700
9 (1)
9 (2)
2400
2000
3 (1)
3 (2)
250
200
10 (1)
10 (2)
2200
2000
4 (1)
4(2)
300
300
11 (1)
11 (2)
1600
2200
5 (1)
5 (2)
700
700
12 (1)
12 (2)
1600
2100
6 (1)
6 (2)
800
300
13 (1)
13 (2)
1300
1400
7 (1)
7 (2)
500
400
14 (1)
14 (2)
150
240
Примечание: * В каждую реакционную смесь вносили по
250 нг тотальной ДНК.
Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека