ЭлБиб

Академик РАСХН Рогов И.А., Кроха Н.Г., Валихов А.Ф.,

НародицкиЙ Б.С., Цветков И .Л ., Комаров А.Б.

СПЕЦИФИЧЕСКОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ ДНК ИЗ ГЕНЕТИЧЕСКИ

МОДИФИЦИРОВАННЫХ РАСТЕНИЙ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

Московский Государственный университет прикладной биотехнологии

ООО "Компания Биоком"

Риск употребления в пшцу продуктов переработки ГМИ человеком не имеет пока

реальных обоснований, однако, доказательств абсолютной безопасности трансгенов для

здоровья человека и его потомства тоже не достаточно. В связи с этим представляются

совершенно необходимыми методы высоко чувствительной и строго специфической

идентификации трансгенных растений и продуктов их промышленной переработки.

Одним из таких методов, наиболее перспективным для широкого внедрения в практику

является полимеразная цепная реакция (ПЦР), оптимизированная для детекции

трансгенной ДНК, присутствие которой в растительном сырье свидетельствовало бы о

генно-инженерном происхождении его источника или содержании в нем

соответствующих примесей.

В соответствии с рекомендациями ИЮПАК и по аналогии с Allin

1.0

мы

разработали свой протокол и соответствующий ему набор реагентов для детекции 35S

промотора в трансгенной ДНК. В ходе разработки мы апробировали чувствительность и

специфичность нашего протокола на пищевых продуктах, а также постарались оценить,

насколько пищевые продукты, произведенные из ГМИ, распространены на рынке Москвы

и Московской области.

Все оборудование и наборы реагентов, использованные нами в работе, если это

особо не оговорено, произведены ООО«Компания Биоком» (Москва).

Выделение ДНК из пищевых продуктов, полуфабрикатов и живого растительного

материала (свекла) производили с использованием набора реагентов ПУН путем

специфической сорбции на суспендированных частицах Nucleo S в соответствии с

прилагаемой к набору инструкцией. Качество полученных препаратов ДНК и ее

приблизительную концентрацию определяли визуально после электрофореза с ТАЕ

буфером в слое 0.8%-ного агарозного геля (окрашивание бромистым этидием,

визуализация в ультрафиолетовом свете). При необходимости получения более точных

данных о концентрации ДНК в полученных препаратах (определение порога

чувствительности ПЦР) пользовались спектрофотометрическим методом. ПЦР проводили

с использованием набора Gene Pack Universal, представляющего собой готовые к

употреблению пробирки, которые содержат ингибированную для «горячего старта» Taq

полимеразу (1 ед.), 200 мкМ каждого из дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, 2,5 мМ

хлорида магния и оптимизированную буферную смесь. В эти пробирки добавляли по 5

мкл препарата ДНК и по 10 пкмоль праймеров, подобранных нами для специфическкой

амплификации фрагмента 35S промотора длиной 160 п.н.: праймер 1 (прямой) 5-CCG

АСА GTG GTC CCA AAG ATG AGG

-У,

праймер 2 (обратный) 5'-АТА TAG AGG AAG

GGT СТТ GCG GAC G-3'; синтезированы праймеры ЗАО «Синтол» (Москва). Программа

амплификации оптимизирована для Amply 4L и состоит из предварительной денатурации

при 94°С в течение 4 мин, 35 циклов, включающих два шага 94°С 45 сек и 72°С 1 мин 10

сек, и «досинтеза» при 72°С в течение 5 мин.

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека