ЭлБиб

Существуют следующие основные методики определения углеводов

методами ВЭЖХ: эксклюзивная хроматография, жидкостно-жидкостная

хроматография, распределительная хроматография, обращенно-фазовая хро

матография, лигандообменная хроматография.

Эксклюзивная хроматография (ЭХ) наиболее пригодна для разделения

смесей УВ, заметно различающихся по молекулярной массе и размерам ча

стиц. При этой методике НФ служит пористое тело или гель и разделение

смеси веществ происходит вследствие различия в размерах молекул и их

способности проникать в определенные поры геля. Этот способ называют

также гель-проникающей хроматографией. Методом ЭХ обычно определя

ют нейтральные олиго- и полисахариды.

При жидкостно-адсорбционной хроматографии в качестве НФ слу

жит твердый адсорбент, а ПФ - жидкость. Обычно в виде твердых адсор

бентов в этом методе применяются угольные носители или подложки на

основе силикагеля.

Жидкостно-жидкостная хроматография (Ж-ЖХ) - метод, в котором в

качестве НФ и ПФ используются несмешивающиеся жидкости, причем жид

кая НФ нанесена на твердый носитель. Разделение УВ методом Ж-ЖХ при

низком давлении традиционно проводили на целлюлозе, в последние годы

все больше используются ионообменные смолы на основе полистирола,

сшитого дивинилбензолом.

Распределительная хроматография (РХ) - метод, в котором НФ служит

жидкий или твердый абсорбент, и разделение смеси веществ происходит в

результате различия в коэффициентах распределения определенных веществ

между подвижной и неподвижной фазами. При распределительном меха

низме хроматографии для гомологических групп наблюдается увеличение

коэффициента емкости. Первыми элюируются дезоксисахара, далее - кето

зы, альдозы и последними полиолы.

Ионообменная хроматография (ИХ) - метод, заключающийся в том, что

в качестве НФ служит катионит или анионит, и разделение смеси ионизиро

ванных веществ происходит в результате различия в константах ионного

обмена. Последовательность элюированию УВ зависит от их рК, концент

рации противоионов в ПФ, pH данной ПФ и температуры. Например, на

ионообменной смоле в литиевой форме достигается хорошее разделение

нейтральных УВ, таких как манноза, лактоза и фруктоза.

Обращенно-фазовая хроматография (ОФХ) - тип ВЭЖХ, в которой НФ

менее полярна, чем ПФ. В качестве сорбентов в ОФХ используются силика

гели, модифицированные октадецильными или фенильными группами, ко

торые обладают гидрофобными свойствами. Поэтому с помощью этого типа

472

Научн я электронная библиотека ЦНСХБ