ЭлБиб

Сосиски, содержащие в своём составе БАД «Цыгапан» (75 мг%),

давали мышам в двух вариантах. Первый предусматривал двухнедель

ное неограниченное суточное потребление без добавления комбикор

мов, второй - замену половины суточной порции получаемых комби

кормов на сосиски.

Для всестороннего исследования комутагенных и антимутагенных

свойств БАД «Цыгапан» и сосисок эксперименты выполняли в соот

ветствии со следующей методикой: 1. БАД вводился однократно со

вместно с мутагеном на срок 24 часа (острый эксперимент); 2. БАД вво

дился в течение 5 дней, последнее введение сочетается с инъекцией

мутагена на срок 24 часа (предобработка); 3. БАД вводился совместно

с мутагеном в течение 5 дней с забоем животных через 24 часа после

последней инъекции.

В качестве мутагенов использовали непрямой алкилирующий агент цик-

лофосфамид (20 мг/кг) и прооксидант диоксидин (200 мг/кг). Мутагены вво

дились внутрибрюшинно, что исключало их возможное прямое взаимодей

ствие с компонентами изучаемой БАД.

Для цитогенетического анализа готовили препараты костного мозга

животных согласно методу Ford и Hamerton, позволяющему микроскопи

чески учитывать повреждения хромосом на стадии метафазы.

С целью накопления метафазного материала мышам внутрибрюшинно

вводили 0,025% раствор колхицина (Serva), по 0,01 мл на грамм массы за

два часа до забоя. Животных умерщвляли смещением шейных позвон

ков, быстро выделяли бедренные кости, из которых вымывали клетки ко

стного мозга теплым гипотоническим раствором (0,55% КС1, 37°С) из

расчета 3,0 мл на каждое животное. Полученную взвесь клеток инкубиро

вали при 37°С на протяжении 15 минут. Затем клетки осаждали центри

фугированием в течение 5 минут при 1000 об/мин (центрифуга ОПН-3).

После центрифугирования сливали супернатант и производили фикса

цию осадка добавлением 3 мл фиксирующей смеси (этанол и ледяная

уксусная кислота в соотношении 3:1). По истечении 10 минут фиксации

следовало повторное центрифугирование и смена фиксатора, затем через

20 минут фиксатор меняли еще раз. После очередного центрифугирова

ния удаляли супернатант, осадок тщательно ресуспензировали в 0,5 мл

охлажденной фиксирующей смеси и наносили в количестве 6-8 капель

на чистые, обезжиренные, охлажденные предметные стекла, которые

высушивали над пламенем спиртовой горелки.

Приготовленные цитогенетические препараты окрашивали в течение 15

минут азур-эозином. В состав красителя входили: 5 частей 0,1 % азура, 10

279

Н учная электронная библиотека ЦНСХБ