13 / 60
ýòî ñâÿçàíî ñ íåäîñòàòêîì èíäóêòîðà (ïðîèçâîäíûõ
öåëëþëîçû) ïðè èñïîëüçîâàíèè ÄÕÎÑ áåç ÌÊÖ,
÷òî îòðèöàòåëüíî âëèÿåò íà ñåêðåöèþ íåîáõîäèìûõ
ôåðìåíòîâ (êàðáîãèäðàç) øòàììà
P. verruculosum
B221A. ×àñòè÷íàÿ çàìåíà ÄÕÎÑ íà ÌÊÖ ïîçâîëÿ-
åò ñòèìóëèðîâàòü áèîñèíòåç öåëëþëîëèòè÷åñêèõ
ôåðìåíòîâ, ÷òî ïîëîæèòåëüíî âëèÿåò íà îáùóþ
äèíàìèêó ïðîäóêöèè ôåðìåíòíîãî êîìïëåêñà ìè-
öåëèàëüíîãî ãðèáà ïðè ïîëó÷åíèè êîìïëåêñíîãî
ôåðìåíòíîãî ïðåïàðàòà.
Ãèäðîëèòè÷åñêóþ (îñàõàðèâàþùóþ) ñïîñîáíîñòü
ôåðìåíòíûõ ïðåïàðàòîâ îïðåäåëÿëè ñîãëàñíî ìåòî-
äèêå [11], èñïîëüçóÿ äðåâåñèíó îñèíû, ïðåäâàðè-
òåëüíî îáðàáîòàííóþ ñ ïîìîùüþ èçìåëü÷åíèÿ íà
øàðîâîé ìåëüíèöå-àêòèâàòîðå òèïà ÀÃÎ-2Ñ â òå-
÷åíèå 10 ìèí. Ãèäðîëèç ñóáñòðàòà èçìåëü÷åííîé
äðåâåñèíû ïðîâîäèëè ïðè 50 °Ñ, ðÍ 5,0 è ïåðåìå-
øèâàíèè. Äîçèðîâêè ôåðìåíòíûõ ïðåïàðàòîâ â ðå-
àêöèîííîé ñìåñè áûëè 5 è 10 ìã áåëêà íà 1 ã ñóá-
ñòðàòà. Îñàõàðèâàþùóþ (ãèäðîëèòè÷åñêóþ) ñïîñîá-
íîñòü ôåðìåíòíûõ ïðåïàðàòîâ îïðåäåëÿëè ïî íà-
êîïëåíèþ ãëþêîçû è âîññòàíàâëèâàþùèõ càõàðîâ â
ðåàêöèîííîé ñìåñè ïîñëå 3, 24 è 48 ÷ ãèäðîëèçà.
Êîíöåíòðàöèþ ãëþêîçû è ÂÑ îïðåäåëÿëè ïðè ïî-
ìîùè ãëþêîçîîêñèäàçíî-ïåðîêñèäàçíîãî ìåòîäà è
ìåòîäà Øîìîäè–Íåëüñîíà ñîîòâåòñòâåííî [8]. Ðå-
çóëüòàòû àíàëèçà êîíöåíòðàöèè ãëþêîçû è ÂÑ ïî-
êàçàíû íà ðèñ. 2 è 3.
Êàê ñëåäóåò èç ðèñóíêîâ, íàèáîëüøèé âûõîä ãëþ-
êîçû è ÂÑ â ïðîöåññå ôåðìåíòàòèâíîãî ãèäðîëèçà
íàáëþäàåòñÿ äëÿ îáðàçöà 1, ïîëó÷åííîãî íà ñðåäå ñ
äîáàâêîé ÌÊÖ, ìèíèìàëüíûé âûõîä ãëþêîçû ó
ôåðìåíòíîãî ïðåïàðàòà, ïîëó÷åííîãî ñ äîáàâêîé
ÄÕÎÑ. Âûõîä ãëþêîçû äëÿ ôåðìåíòíîãî ïðåïàðàòà,
ïîëó÷åííîãî íà ñðåäå ñ ñîîòíîøåíèåì ÌÊÖ:ÄÕÎÑ
1:1 (îáðàçåö 4) áûë ïðàêòè÷åñêè òàêèì æå, êàê è
äëÿ îáðàçöà 1. Âèäèìî, ýòî ñâÿçàíî ñ áîëåå âûñîêîé
β
-ãëþêîçèäàçíîé àêòèâíîñòüþ â ïðåïàðàòå 4 è ñî-
îòâåòñòâåííî áîëåå ïîëíîé êîíâåðñèåé ðàñòèòåëü-
íûõ ïîëèñàõàðèäîâ â ãëþêîçó.
Òàêèì îáðàçîì, íàèáîëåå ïðèåìëåìûå ðåçóëüòàòû
ïî îïòèìèçàöèè äîáàâîê íàáëþäàþòñÿ â ñëó÷àå èñ-
ïîëüçîâàíèÿ ñìåñè ÌÊÖ è ÄÕÎÑ â ñîîòíîøåíèè
1:1 ïî ìàññå. Ñ îäíîé ñòîðîíû, óðîâåíü ýêñïðåññèè
âñåõ öåëåâûõ ôåðìåíòîâ è êîíöåíòðàöèÿ ñåêðåòèðó-
åìîãî áåëêà ê 144 ÷ êóëüòèâèðîâàíèÿ äîñòàòî÷íî âû-
ñîêè, ñ äðóãîé ñòîðîíû, çàìåíà ïîëîâèíû âíîñèìîé
ÌÊÖ íà ÄÕÎÑ óäåøåâëÿåò ïðîöåññ íàðàáîòêè ôåð-
ìåíòíîãî êîìïëåêñà ïðåïàðàòà, ñåêðåòèðóåìîãî
øòàììîì
P. verruculosum
B221A.
Ðàáîòà áûëà âûïîëíåíà ïðè ïîääåðæêå ôåäå-
ðàëüíîé öåëåâîé ïðîãðàììû «Èññëåäîâàíèÿ è ðàç-
ðàáîòêè ïî ïðèîðèòåòíûì íàïðàâëåíèÿì ðàçâèòèÿ
íàó÷íî-òåõíîëîãè÷åñêîãî êîìïëåêñà Ðîññèè íà
2007–2012 ãîäû» ïî êîíòðàêòó 16.522.12.2003 îò
31.05.2011 ã.
Ë è ò å ð à ò ó ð à
1.
Uhlig, H.
Industrial enzymes and their application. John
Willey and Sons Inc. 1998. – 454 p.
2.
Ãðà÷åâà, Ì.Í.
Òåõíîëîãèÿ ôåðìåíòíûõ ïðåïàðàòîâ /
M.H.Ãðà÷åâà, À.Þ.Êðèâîâà. – Ì., 2000.
3.
Ñîëîâüåâà, Ê.Â. [è äð.]
// Ìèêðîáèîëîãèÿ. – 2005. –
Ò. 74. – Â. 2. – Ñ. 1–7.
4.
Ñêîìàðîâñêèé, À.À. [è äð.]
// Ïðèêëàäíàÿ áèîõèìèìèÿ
è ìèêðîáèîëîãèÿ. – 2006. – Ò. 42. – Â. 6. – Ñ. 674–680.
5.
Astrid, R. Strieker & Robert L. Mach & Leo H. de Graaff
//
Appl Microbiol Biotechnol. – 2008. – 78. – P. 211–220.
6.
Pamela, K. Foreman et al.
// JBC. – 2003. – V. 278. –
¹. 34. – P. 31988–31997.
7.
Íåìàøêàëîâ, Â.À.
Áèîñèíòåç êàðáîãèäðàç ãðèáà
Penicillium verruculosum ïðè êóëüòèâèðîâàíèè íà ðàç-
ëè÷íûõ öåëëþëîçîñîäåðæàùèõ ñóáñòðàòàõ: àâòîðåô. äèñ..
êàíä. áèîë. íàóê. / Â.À.Íåìàøêàëîâ. – Ì.: Ïóùèíî, 2012.
8.
Ñèíèöûí, À.Ï.
Áèîêîíâåðñèÿ ëèãíîöåëëþëîçíûõ
ìàòåðèàëîâ / À.Ï.Ñèíèöûí, À.Â.Ãóñàêîâ, Â.Ì.×åðíîãëà-
çîâ. – Ì.: ÌÃÓ, 1995. – 224 ñ.
9.
Ñèíèöûí, À.Ï.
Ìåòîäû èññëåäîâàíèÿ è ñâîéñòâà öåë-
ëþëîëèòè÷åñêèõ ôåðìåíòîâ / À.Ï.Ñèíèöûí, Â.Ì.×åð-
íîãëàçîâ, À.Â.Ãóñàêîâ. – Ì.: ÂÈÍÈÒÈ, 1990. – Ò. 25. –
Ñ. 30.
10.
Êîðîòêîâà, Î.Ã. [è äð.]
// Áèîõèìèÿ. – 2009. –
Ò. 74. – ¹ 5. – Ñ. 699–70.
11.
Ìîðîçîâà, Â.Â. [è äð.]
// Ïðèêëàäíàÿ áèîõèìèÿ è
ìèêðîáèîëîãèÿ. – 2009. – Ò. 46. – ¹ 3. – Ñ. 397–400.
11
ХРАНЕНИЕ И ПЕРЕРАБОТКА СЕЛЬХОЗСЫРЬЯ, № 1, 2013
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Обр.
1
Обр.
2
Обр.
3
Обр.
4
Обр.
1
Обр.
2
Обр.
3
Обр.
4
Обр.
1
Обр.
2
Обр.
3
Обр.
4
3 ч
24 ч
48 ч
С(ВС),
/л
Ðèñ. 3. Âûõîä âîññòàíàâëèâàþùèõ ñàõàðîâ ïðè ôåðìåíòà-
òèâíîì ãèäðîëèçå èçìåëü÷åííîé îñèíû. Óñëîâèÿ: 50 °Ñ; ðÍ 5;
[S] = 100 ã/ë (ÑÂ); ïåðåìåøèâàíèå 250 ìèí
-1
; äîçèðîâêà ïðå-
ïàðàòà ïî áåëêó: –5 è – 10 ìã/ã ñóõîãî ñóáñòðàòà
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Обр.
1
Обр.
2
Обр.
3
Обр.
4
Обр.
1
Обр.
2
Обр.
3
Обр.
4
Обр.
1
Обр.
2
Обр.
3
Обр.
4
3 ч
24 ч
48 ч
С(Гл ),
/л
Ðèñ. 2. Âûõîä ãëþêîçû ïðè ôåðìåíòàòèâíîì ãèäðîëèçå èç-
ìåëü÷åííîé îñèíû. Óñëîâèÿ: 50 °Ñ; ðÍ 5; [S] = 100 ã/ë (ÑÂ);
ïåðåìåøèâàíèå – 250 ìèí
-1
; äîçèðîâêà ïðåïàðàòà ïî áåëêó:
–5 è – 10 ìã/ã ñóõîãî ñóáñòðàòà
Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека