ЭлБиб

ХРАНЕНИЕ И ПЕРЕРАБОТКА СЕЛЬХОЗСЫРЬЯ, № 10, 2012

с молекулярной массой от 10 000 до 32 000; шесть

фракций проламинов (глиадинов) с молекулярными

массами от 19 800 до 78 000; четыре фракции глюте-

линов (глютенинов) с молекулярными массами от

40 000 до 100 000. Элюент — фосфатный буферный

раствор (рН 4,5).

На сефадексе G-100 было получено пять фракций

альбуминов с молекулярной массой от 6200 до

26 000; пять фракций глобулинов с молекулярной

массой от 7000 до 28 500; шесть фракций глиадинов

с молекулярной массой от 18 500 до 56 000 и четыре

фракции глютелинов с молекулярной массой от

40 000 до 100 000. Длительность разделения состави-

ла 2 ч 30 мин при угле наклона 15°.

Растворы альбуминов и глобулинов пшениц 1-го

и 2-го класса, полученные экстракцией по схеме

Осборна, фракционировали методом ТСГХ на

сефадексе G-50, G-75, G-100 и G-200 [2]. Наши

результаты в сравнении с данными, полученными

другими методами исследования, представлены в

табл. 1.

Из данных таблицы можно увидеть, что ММ аль-

буминов, полученные методом ТСГХ, практически

не отличаются от величин, полученных методом

ультрацентрифугирования и гельфильтрации на

ДЭАЭ-целлюлозе, но несколько больше величин,

рассчитанных по аминокислотному составу.

Пшеничная мука

. Анализ суммарных белков муки

пшеничной высшего сорта на G-50 показал шесть

фракций с молекулярными массами от 10 800 до

75 000 при элюировании дистиллированной водой и

семь фракций с молекулярными массами от 9000 до

81 000 при элюировании в фосфатном буферном рас-

творе (рН 8,0) при длительности процесса 1 ч 15 мин

и угле наклона 12°.

Белки пшеничной муки первого сорта на том же

сорбенте показали в фосфатном буфере от шести до

восьми фракций белков с молекулярной массой от

6000 до 81 000, а в дистиллированной воде то же

количество фракций с молекулярной массой от 5500

до 67 000.

Хроматографический анализ фракционных бел-

ков пшеничной муки проводили на сефадексе

G-50 и G-100 в фосфатном буферном растворе (рН

6,86). На сефадексе G-50 было получено четыре

фракции альбуминов с молекулярной массой от

9000 до 21 500; пять фракций глобулинов с моле-

кулярной массой от 10 000 до 31 000; семь фракций

глиадинов с молекулярной массой до 76 000; четы-

ре фракции глютелинов с молекулярной массой от

40 000 до 100 000. Продолжительность разделения

составила 1 ч 15 мин при угле наклона 15°.

В табл. 2 и 3 приведены данные, суммирующие

наши результаты определения ММ глиадиновых и

глютениновых фракций пшеницы двух сортов в

сравнении с литературными данными, полученны-

ми разными методами, в том числе и колоночным

методом ГПХ. Представляется, что эти данные —

самое определенное подтверждение вышесказан-

ного.

Обсуждение большого материала по аналитичес-

кому исследованию суммарных и фракционных бел-

ков зерна сортовой и рядовой пшеницы и сортовой

пшеничной муки основывается на том, что все

исследованные образцы имеют одинаковый харак-

тер по фракционному составу в качественном отно-

шении. Различия заключаются в количественном

соотношении фракций [4].

В суммарном белке нами обнаружено от восьми

до десяти фракций, тогда как ранее с помощью

обычной колоночной гель-хроматографии можно

было обнаружить только четыре фракции. При

использовании дифференцирующих растворителей

было обнаружено до 30 фракций, тогда как ранее,

пользуясь дифференциальным растворением, пос-

ледующими гель-хроматографией, электрофорезом

и другими дополнительными методами, получали в

сумме около 35 фракций, причем речь идет о сумме

работ нескольких исследователей, а не одного или

отдельной группы.

Таким образом, очевидно, что разрешающая спо-

собность метода ТСГХ значительно больше, чем

метода колоночной гель-хроматографии, вместе с

тем метод ТСГХ один может заменить сразу два или

три других метода анализа белковых компонен-

тов.

Результаты количественного анализа, представ-

ленные в табл. 4, показывают заметное сходство в

оценке долей высокомолекулярных белков в сорто-

вых пшеницах и заметное различие в доле этих

фракций в рядовой пшенице (примерно порядка

10%).

Результаты количественного анализа фракцион-

ных белков представлены в табл. 5. Из приведенных

данных можно видеть четко представленный моле-

кулярный состав глютенина (глютелина) и «размы-

вание» глиадиновой (проламиновой) фракции между

низкомолекулярными и высокомолекулярными

составляющими белка [2, 4].

Методы определения

Молекулярная масса

Альбумин 13-А Альбумин 13-Б

Метод

ультрацентрифугирования

24800; 26000

13950

Метод электрофореза

в присутствии ДДС-Na

—

13200

Показатели, рассчитанные

по аминокислотному составу

20000

12900

Гельфильтрация

на ДЭАЭ-целлюлозе

и ультрацентрифугирование

19800; 23000

11200

Метод ТСГХ:

сефадекс G-50

22000±930

26100±930

13800±490

сефадекс G-75

26000±930 11000±550

сефадекс G-100

19200±490 11000±550

сефадекс G-200

24000±930 13400±490

Таблица 1

Сравнение литературных данных молекулярных масс

альбуминов пшеницы и полученных методом ТСГХ

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библ отека