ЭлБиб

оторые о рашивали на липиды с даном черным В

(в 10 мл 70%-но о этанола 20 м навес и расителя).

Пол ченные истоло ичес ие препараты из чали

при помощи светово о ми рос опа Micros MC 300A.

Цифровые фото рафии пол чали с помощью цифро-

вой амеры CХ 13с фирмы Baumer.

В нашей работе был использован одноэтапный

имм но истохимичес ий метод выявления анти-

апоптотичес о о бел а Bcl-2 на замороженных сре-

зах — вариант непрямо о стрептавидин-авидиново о

метода [12]. Демас иров анти енных бел овых

мар еров Bcl-2 проводили ин бированием на водя-

ной бане при температ ре 96 °С в 0,01М цитратном

б фере с рН 6,0 в течение 10 мин. Затем срезы остав-

ляли в б фере для остывания при омнатной темпе-

рат ре на 30 мин. После это о их промывали в трех

сменах дистиллированной воды по 5 мин. Бло иро-

вание эндо енной перо сидазы проводили ин би-

рованием в 3%-ном водном растворе пере иси водо-

рода в течение 10 мин. Промывали в трех сменах дис-

тиллированной воды и в трех сменах фосфатно о б -

фера (по 5 мин в аждой). Потом ин бировали с

нормальной бло ир ющей неимм нной сыворот ой

в течение 20 мин при омнатной температ ре. После

это о ин бировали с первыми (специфичными в от-

ношении Bcl-2) антителами в течение 1 ч в термоста-

те при 37 °С, промывали в трех сменах фосфатно о

б фера по 5 мин. Далее ин бировали со вторыми

биотинилированными антителами (30 мин при ом-

натной температ ре), промывали в трех сменах фос-

фатно о б фера (по 5 мин). Ин бацию со стрепта-

видин-биотин-перо сидазным омпле сом прово-

дили 30 мин при омнатной температ ре и промыва-

ли в трех сменах фосфатно о б фера по 5 мин. Далее

срезы ин бировали в растворе диаминобензидина

(5 мин). После промыв и срезов в трех сменах дис-

тиллированной воды (по 5 мин) их до рашивали е-

мато силином и промывали водой. Де идратацию

срезов проводили в след ющей последовательности:

1 — этиловый спирт 96%-ный; 2 — этиловый спирт

96%-ный; 3 — силол; 4 — силол; 5 — силол (в

аждом растворе по 3 мин). Обезвоженные срезы за-

лючали в бальзам. Срезы из чали при помощи ми -

рос опа MS300A (Австрия). Цифровые фото рафии

пол чали с помощью цифровой амеры Baumer

optronic CX13c.

В сыворот е рови определяли общее содержание

витамина А [10, 13]. В пробир и на 10 мл с притертой

проб ой вносили 0,4 мл сыворот и рови. Добавля-

ли 2,5 мл этанола, свободно о от о исленных про-

д тов, и затем 2,5 мл химичес и чисто о е сана.

Пробир и интенсивно встряхивали в течение 30 с

и центриф ировали 1 мин при 900 g. Верхнюю е -

санов ю фаз (1,5 мл) переносили в ювет и на

спе трофл ориметре Hitachi MPF-4 измеряли фл о-

ресценцию на длине волны возб ждения 340 нм,

эмиссии – 490 нм. В ачестве стандарта использова-

ли ретинолпальмитат, вносимый в состав э спери-

ментальных смесей. Калибровочная ривая была

линейна в измеряемой области онцентраций вита-

мина А. Стандарт вносили непосредственно в про-

бы е саново о э стра та (1,5 мл) в оличестве 5 м л

(1 м ретинолпальмитата/мл).

Статистичес ю обработ проводили с использо-

ванием па етов статистичес их про рамм Statistica 6.

Достоверность различий оценивали по ритерию

Стьюдента при 95 % ровне значимости. Э спери-

менты выполнены с соблюдением принципов ман-

ности в соответствии с «Правилами проведения ра-

бот с использованием э спериментальных живот-

ных» (При аз Минздрава СССР от 12.08.77).

В р ппе онтрольных животных о рас а образ-

цов ожи на липиды с даном В по азала, что сродст-

во омпонентов эпидермиса и дермы расителю

незначительно. В ро овом слое эпидермиса выявле-

но незначительное о рашивание е о отдельных ча-

ст ов. В собственно оже или дерме сосоч овый

слой не содержит липидпозитивных омпонентов, и

толь о в л бо их слоях дермы (в области сальных

желез ожи) выявляются единичные, мел ие липид-

ные в лючения (рис. 1).

В р ппе животных, пол чавших липосомальные

ванны, отмечено более выраженное о рашивание

стр т р ожи по сравнению с онтрольной р ппой

(рис. 2–5). С дан В-позитивное о рашивание выяв-

ляется в эпидермисе, преим щественно в ро овом и

ХРАНЕНИЕ И ПЕРЕРАБОТКА СЕЛЬХОЗСЫРЬЯ, № 3, 2010

Рис. 1. Кожа инта тных животных (о рас а с даном В,

в. об.

×1

0, о .

10)

Рис. 2. Кожа животных через 1 ч после пол чения липосомаль-

ной ванны (о рас а с даном В): а – ожа (

в.об.

10, о .

10);

б – ожа (

в.об.

10, о .

10); в – ожа (

в.об

40, о .

10);

– ожа (

в.об.

40, о .

10); д – ожа (

в.об

40, о .

10)

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека