ЭлБиб

•

2010

ПИВО

НАПИТКИ

ТЕХНОЛОГИЯ

Рис. 3.

Влияние длительности

предынкубации ферментного

раствора на активность

BG Glucanase Complex

снижение или увеличение темпе-

ратуры всего на 5 °С приводило

к существенному снижению ак-

тивности. В этой связи применение

алкилоксибензола на стадии пред-

ынкубации раствора ферментного

препарата с учетом вышеотмечен-

ной его стабилизирующей способ-

ности в отношении макромолекул

биополимеров представляется весь-

ма целесообразным. С целью под-

тверждения данного предположе-

ния исследовали влияние алкилок-

сибензола в окисленной и восста-

новленной формах на активность

ферментного препарата. Предынку-

бацию 1%-ных растворов фермент-

ного препарата проводили в ультра-

термостате в течение 1 ч при тем-

пературе 50 °С при концентрации

АОБ от 0,05 до 1,5 мг/см

. Фер-

ментативную активность выражали

в процентах по отношению к кон-

тролю (раствор ФП без добавления

АОБ). Данные, представленные

на рис. 1, свидетельствуют о том,

что добавление С7-АОБ на стадии

предынкубации раствора фермент-

ного препарата приводит к значи-

тельному увеличению активности.

Наибольший эффект достигает-

ся при концентрации 1,0 мг/см

при этом несущественно, в какой

форме используется алкилокси-

бензол.

Проведение предварительной

активации ферментного комплек-

са Laminex BG Glucanase Complex

в присутствии АОБ способствует

интенсификации последующего

гидролиза некрахмальных поли-

сахаридов, что демонстрируется

на примере гидролиза фильтро-

вальной бумаги (рис. 2). При кон-

центрации АОБ 1,0 мг/см

содер-

жание глюкозы в гидролизате уже

через 30 мин гидролиза в 2,5 раза

выше, чем в контроле. Подобный

эффект сохраняется при увеличе-

нии продолжительности гидролиза

до 90 мин.

В результате исследований (рис. 3)

установлено, что повышение актив-

ности ферментного комплекса Lam-

inex BG Glucanase Complex зависит

от длительности предынкубации

раствора ферментного препарата

с С7-АОБ при температуре 50 °С.

Анализ полученных данных по-

зволяет сделать заключение, что

проведение предынкубации фер-

ментного препарата с С7-АОБ при

50 °С в течение 30 или 60 мин при-

водит к увеличению активности

по отношению к контролю (предын-

кубация без АОБ) соответственно

в 2,3 и 2,5 раза, а по отношению

к «нулевому» контролю (без АОБ

предынкубация — 0 мин) — соот-

ветственно в 3,2 и 3,8 раза.

Повышение ферментативной ак-

тивности при использовании дан-

ного АОБ, по-видимому, связано

с изменением конформации бел-

ковой молекулы фермента в сто-

рону повышения доступности ее

каталитического центра и центров

связывания, а также с таким повы-

шением стабильности целлюлазно-

го комплекса, которое позволило

снизить ингибирующее действие

субстрата и конечных продуктов

реакции на фермент.

Стабильность — важнейшая ха-

рактеристика ферментов, опреде-

ляющая их применение в пищевых

технологиях, в том числе в пивова-

рении.

Поскольку стабилизация фер-

мента в результате модификации

молекулы белка должна проявлять-

ся в повышении устойчивости бел-

ковой молекулы к денатурирующим

воздействиям, мы изучили влияние

С7-АОБ на рН-стабильность и тер-

мостабильность ферментного пре-

парата Laminex BG Glucanase Com-

plex.

О стабильности ферментного

комплекса Laminex BG Glucana-

se Complex судили по изменению

ферментативной активности при

различных значениях возмущаю-

щих параметров (рН и температу-

ра). С этой целью проводили пред-

ынкубацию ферментного раствора

без АОБ и ферментного раствора

с добавлением АОБ в диапазоне рН

3,3–8,0 (температура 50 °С) и тем-

ператур 45…70 °С (рН 4,7) в тече-

ние 60 мин. Активность оценива-

ли в стандартных условиях и вы-

ражали в процентах к контролю

(инкубация раствора ферментного

препарата при 50 °С). Анализ по-

лученных данных (рис. 4) показы-

вает, что повышенная активность

ферментного комплекса Laminex

BG Glucanase Complex сохраняется

в широком диапазоне рН (3,3–6,0)

при использовании С7-АОБ в каче-

стве стабилизирующего фактора

при проведении предынкубации

его раствора, однако максимальная

активность наблюдается при рН

4,7–5,0.

Рассматривая результаты иссле-

дований по рН-стабильности препа-

рата, надо учитывать, что эффект

влияния на стабильность фермен-

та связан прежде всего с влиянием

кислотности среды на ионизацию

функциональных групп белковой

части фермента, а также кофак-

торов, что может сказываться

на конформации молекулы (и,

как следствие, на сродстве фер-

мента к субстрату) и даже приво-

дить к инактивации фермента [7].

Как следует из данных, представ-

ленных на рис. 4, проведение пред-

ынкубации с С7-АОБ позволило

расширить рН-интервал действия

ферментного препарата Laminex

BG Glucanase Complex: активность

препарата выше, чем в контроле,

в 2–2,5 раза при рН 3,3–6,0 Анало-

гичное стабилизирующее действие

С7-АОБ отмечается и по данным

исследования термостабильно-

сти. В отсутствие С7-ВОБ даже

небольшие колебания температу-

ры от 50 °С приводят к падению

ферментативной активности, в то

время как в присутствии С7-АОБ

ферментативная активность выше,

чем в контроле, в 2–2,5 раза в диа-

пазоне 50…60 °С (рис. 5).

Использование восстановленной

формы С7-АОБ приводило к анало-

гичным результатам с незначитель-

ным снижением активирующего

эффекта.

Результаты проведенных иссле-

дований позволяют сделать заклю-

чение, что эффективность примене-

ния в пивоварении цитолитическо-

го ферментного комплекса Lami-

nex BG Glucanase Complex мо-

Время предынкубации, мин

400

350

300

250

200

150

100

ФА, %

Контроль (без С7-АОБ)

Опыт (с С7-АОБ)

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека