ЭлБиб

ПИЩЕВАЯ ПРОМЫШЛЕННОСТЬ

12/2012

RAW MATERIALS AND ADDITIVES

точной суспензии с цитозом 10

кле

ток/мл вносили в лунки стерильных

черные 96 луночных планшетов c

высокой сорбирующей способнос

тью (Greiner Bio One, Австрия). Для

осаждения и прикрепления клеток к

поверхности культурального пласти

ка планшеты инкубировали в термо

стате в течение 24 ч, с последующим

внесением по 100 мкл стерильных

растворов пектинов (0,01–0,5 мг/

мл) и инкубацией клеток при 37 °С в

течение 2 ч. После инкубации клеток

с растворами пектинов содержимое

лунок аспирировали, добавляли по

100 мкл 10 мкM раствора DCFH DA и

вновь проводили инкубацию при

37 °С в течение 30 мин. По заверше

нии инкубации аспировали содер

жимого лунок и вносили в них по

100 мкл 10 мM раствора AAPH. Ин

тенсивность флуоресценции (воз

буждение флуоресценции при 485 нм,

регистрация – при 528 нм) опреде

ляли непосредственно после внесе

ния в лунки раствора AAPH и спустя

30, 60 и 90 мин инкубации в термо

стате при 37 °С. Контролем служили

лунки, в которые добавляли культу

ральную среду без пектинов. Раз

ность интенсивности флуоресценции

в начальный момент времени и по

истечении 30; 60 и 90 мин инкуба

ции клеток с раствором азо инициа

тора нормировали на ее величину в

контрольных лунках через 90 мин

инкубации клеток с раствором азо

инициатора. Достоверность отличий

показателей относительной интен

сивности флуоресценции в контроле

и при прединкубации клеток с ра

створами пектинов оценивали по

критерию Стьюдента, а отличия счи

тали достоверными при уровне зна

чимости

<0,05.

Проведен сравнительный анализ

антиоксидантных и физико хими

ческих свойств пектинов из различ

ных растительных источников на

эукариотических клетках линий HT29

и MDCK1 в условиях экзогенной ин

дукции окислительного стресса.

Сравнительная характеристика

физико химических свойств иссле

дуемых пектинов представлена в

таблице. Все исследуемые образцы

относятся к пектинам, так как содер

жание полигалактуроновой кислоты

в пересчете на сухую обеззоленную

навеску во всех образцах составляет

более 65 %, однако в расчете на

фактическую массу ее содержание

варьирует от 56 % (цитрусовый АРА

105LV) до 81 % (тыквенный пектин).

При сопоставимой (7–9 %) массо

вой доле влаги содержание пектино

вых веществ в исследованных образ

цах пектинов составляет от 49 %

(стандартизованные яблочный и

цитрусовый пектины APА 104 и цит

русовый АРА 105LV) до 81 % (тык

венный пектин). По величине степе

ни этерификации (>50 %) все иссле

дованные пектины относятся к высо

кометоксилированным [16]. Наи

меньшей величиной степени этери

фикации среди исследованных пек

тинов характеризовался образец

АРА 105LV (59 %), наибольшей –

тыквенный пектин (72 %). По види

мому, данный факт обусловлен как

различиями в технологиях получе

ния данных пектинов, так и особен

ностями используемого сырья. Так,

активность пектинэстеразы в тыквен

ных выжимках в 10–15 раз ниже по

сравнению с таковой для яблочных

выжимок [17], что обусловливает

большую сохранность пектина при

его выделении из плодов тыквы.

За прямое антиоксидантное дей

ствие пектинов ответственны остатки

ароматических гидроксикислот, вхо

дящих в их состав [7, 8]. Общее со

держание фенольных веществ в ис

следованных пектинах лежит в диа

пазоне от 1,0 (пектины тыквенный и

АРА 105 LV) до 2,4 мг ЭГК/г (см. таб

лицу). При этом наибольшим общим

содержанием фенольных веществ

среди исследованных пектинов ха

рактеризуются препараты, получен

ные из яблочных выжимок.

Среди исследованных образцов

тыквенный пектин обеспечивает так

же максимальную вязкость в 1 %

ном растворе – 37,9 сП. По величине

динамической вязкости тыквенный

пектин не уступает пектину из корзи

нок подсолнечника, полученному

путем экстракции водным раствором

гексаметафосфата натрия [18]. При

близкой величине степени этерифи

кации с яблочным пектином марки

АРА 103 (70,6 %) динамическая вяз

кость раствора тыквенного пектина

(степень этерификации 71,3 %) в 2,1

раза выше (см. таблицу), что обус

ловлено в 1,2 раза более высоким

содержанием в нем пектиновых ве

ществ. Кроме того, различия в вели

чинах динамической вязкости ра

створов исследуемых пектинов могут

быть обусловлены отличиями в их

средневесовых молекулярных мас

сах. Сравнение величин динами

ческой вязкости растворов яблоч

ного и цитрусового пектинов марок

АРА 104 и АРА 105LV с одинаковой

массовой долей пектиновых ве

ществ свидетельствует о возраста

нии динамической вязкости ра

створов пектина при увеличении

его степени этерификации (см. таб

лицу), что согласуется с литератур

ными данными [19]. Таким обра

зом, динамическая вязкость и ско

рость диффузионных процессов в

растворах пектина определяются

как содержанием, так и степенью

этерификации пектиновых ве

ществ, что следует учитывать при

исследовании их биологических

эффектов на модельных клеточных

системах.

В результате проведенных экспе

риментов по определению антиокси

дантных свойств пектинов

in vitro

на

культуральных моделях MDCK1 и

НТ 29 установлено, что у всех иссле

дованных пектинов показано нали

чие антиоксидатных свойств на ли

нии клеток почки собаки MDCK1.

При этом наиболее выраженный ан

тиоксидантный эффект отмечался

при самой высокой концентрации

исследованных пектинов – 0,5 мг/

мл. Антиоксидантный эффект пекти

нов в концентрации 0,5 мг/мл убы

вал в ряду: цитрусовый пектин мар

ки АРА 105LV > тыквенный пектин >

яблочный пектин марки АРА 104 >

яблочный пектин АРА 103.

При прединкубации клеток с яб

лочными пектинами марок АРА 103,

АРА 104 на 90 мин эксперимента по

казано статистически значимое

<0,05) снижение интенсивности

свободнорадикального окисления

(СРО) при концентрациях пектинов

0,1 и 0,5 мг/мл, а с цитрусовым пек

тином марки АРА 105LV и тыквен

ным пектином уже при концентра

ции 0,01 мг/мл. При концентрации

0,1 мг/мл антиоксидантный эффект

пектинов снижался в ряду: тыквен

ный пектин > цитрусовый пектин

марки АРА 105LV > яблочный пектин

марки АРА 104 > яблочный пектин

АРА 103.

В целом, наиболее выраженное

по абсолютной величине снижение

Физико химические свойства пектинов из

различных растительных источников

ртемараП

кыТ

нев

йын

ниткеп

чолбЯ

йын

ниткеп

301APA

чолбЯ

йын

ниткеп

401APA

осуртиЦ

кепйыв

APAнит

VL501

ялодяавоссаМ

%,игалв

3,7

6,8

8,7

1,8

ялодяавоссаМ

хывониткеп

%,*втсещев

±8,08

4,0

±1,95

5,0

±5,94

1,0

±4,94

3,0

ялодяавоссаМ

оруткалагилоп

йовон

%,*ытолсик

56,08

29,27

83,95

84,55

ялодяавоссаМ

евхыньлонеф

г/KГЭгм,втсещ

±40,1

50,0

±14,2

10,0

±84,1

10,0

±4100

20,0

етэьнепетС

%,иицакифир

±3,27

6,0

±6,07

3,0

±0,46

5,0

±9,85

4,0

яаксечиманиД

%1ьтсокзяв

ирпаровтсар

Пс,С°32

09,73

01,81

00,21

40,7

.уссамюуксечиткафанетечсарв–*

Электр нная Научная СельскоХозяйственная Библиотека