ЭлБиб

304 / 592

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ
ПОЛУЧ ЕНИЕТРАНСГЕННЫХФОСФИНОТРИЦИНУСТОЙЧИВЫХ
РАСТЕНИЙИАНАЛИЗНАСЛЕД О ВАНИЯBAR-ГЕНАУ
КОММЕРЧЕСКИХЛИНИЙГОРОХА
СимоненкоЮ.В., КучукН.В., Глеба Ю.Ю.
Институт клеточной биологии и генетической инженерии Национальной
академии наук Украины 252143, г.Киев-143, ул. акад. Заболотного, 14S, Украина
E-Mail:
Д ля получения трансгенных фосфинотрицин-устойчивых растений
у ко м м е р ч е с ки х линий гороха по севно го ( Pisum sativum L ) была
использована систем а двойной трансф ормации. Эта система состоит
из д вух этапов:
1) получение регенерационных линий гороха после трансформации
"shooty" мутантом A.tumefaciens pG V 2206;
2) тран сф орм ац и я регенерационны х линий конструкцией рКЗ .
которая содержит два гена: З5S-фосфинотрицинацетилтрансферазы (bar)
и nos-неомицинфосфотрансферазы (nptll).
После трансформации 8 исходных линий гороха плазмидой pGV2206
были отобраны 3 регенерационных линии, которые затем использовали
на следующем этапе трансформации. Фосфинотрицинустойчивые линии
гороха были получены после трансф ормации регенерационны х линий
бин а рны м и в е ктор амы A.tumefaciens рМР 90 рКЗ и pG V 2206 рКЗ .
Трансф ормированны й каллус отбирали на среде, содержащей 10 мг/л
глюфозината аммония. Через несколько пассажей на регенерационной
среде начинался органогенез. Трансф ормированные растения также
о тб и ра л и на ср ед е , с о д е рж ащ е й 10 м г/л глюф о зи н а та ам м он и я .
Т р а н сге н ны е ф е р ти л ь ны е ра стен и я гороха вы р ащ и в а л и in vitro .
Полученные гербицидоустойчивые растения прививали на нормальные
растения гороха в тепличны х условиях для получения семян, потом у
что корнеобразование у этих линий было подавлено. Кроме того, была
разработана система получения семян в культуре in vitro. Гены bar и
nptll экспрессировались ка к у исходных трансгенны х растений гороха,
та к и у растений следующих поколений, в которых они показали типичное
М енделевское наследование 3 :1 . Передача введенного гена потомкам
трансгенны х растений изучалась на двух поколениях, в результате чего
была показана стабильная интеграция bar-гена. Трансформация растений
бы л а п о д т в е р ж д е н а м е то д а м и п о л и м е р а з н о й ц е п н о й р е а кц и и ,
С а у з е р н б л о т г и б р и д и з а ц и е й и а н а л и з о м а к т и в н о с т и
неомицинфосфотрансферазы.
3 0 4
Научная электронная библиотека ЦНСХБ