ЭлБиб

Публикации аспирантов

/ НАУЧНАЯ ЖИЗНЬ

№4 август 2009

Всё о МЯСЕ

÷èñëå, ñïîñîáíû êðîøèòüñÿ èëè

ëîìàòüñÿ, à âî âðåìÿ îêðàøèâà-

íèÿ — òåðÿòü ñâîþ ïåðâîíà-

÷àëüíóþ ôîðìó, óïëûâàòü, ðàç-

ðóøàòüñÿ, ñìîðùèâàòüñÿ ïðè

çàêëþ÷åíèè â ãëèöåðèí-æåëàòèí.

Ýòî íåðåäêî ïðèâîäèò ê íåâîç-

ìîæíîñòè ïîëó÷åíèÿ ïîëíîöåí-

íûõ ãèñòîëîãè÷åñêèõ ïðåïàðàòîâ

äëÿ äàëüíåéøåãî èññëåäîâàíèÿ.

Îäíîé èç ïðè÷èí íèçêîãî êà÷åñòâà

ïðåïàðàòîâ ÿâëÿåòñÿ èõ ïîäñûõà-

íèå âî âðåìÿ ïðîïèòêè æåëàòèíîì

â òåðìîñòàòå, à òàêæå êðèñòàëëèçà-

öèÿ âîäû, îñòàâøåéñÿ ïîñëå ïðî-

ìûâêè â òêàíè, ïðè îõëàæäåíèè

ìàòåðèàëà â ìèêðîòîìå.

Äëÿ òîãî ÷òîáû ñäåëàòü âîç-

ìîæíûì ïðîâåäåíèå ñòàòèñòè÷å-

ñêè äîñòîâåðíûõ êîëè÷åñòâåííûõ

èññëåäîâàíèé ìÿñíûõ ïðîäóêòîâ,

î÷åíü âàæíî ïîëó÷èòü âûñîêîêà-

÷åñòâåííûå ãèñòîëîãè÷åñêèå ïðå-

ïàðàòû, ÷òî äàëåêî íå âñåãäà óäà-

åòñÿ ñ ïîìîùüþ ñóùåñòâóþùèõ

òðàäèöèîííûõ ìåòîäîâ îáðàáîòêè

îáðàçöîâ.

Â ñâÿçè ñ ýòèì íàøåé ëàáîðà-

òîðèåé Ìèêðîñòðóêòóðíûõ èññëå-

äîâàíèé ìÿñîïðîäóêòîâ áûëà ðàç-

ðàáîòàíà íîâàÿ ìîäèôèêàöèÿ

ìåòîäà ôèêñàöèè ôîðìàëèíîì,

êîòîðàÿ ïîçâîëÿåò ãîðàçäî â áîëü-

øåé ìåðå ñîõðàíèòü ïðè îêðàñêå

öåëîñòíîñòü ïîëó÷àåìûõ ñðåçîâ.

Ìîäèôèêàöèÿ ìåòîäà ñîñòîèò

â ñëåäóþùåì. Ñíà÷àëà èññëåäóå-

ìûé ïðîäóêò ðåæóò íà çàìîðàæè-

âàþùåì ìèêðîòîìå ïðè òåìïåðà-

òóðå –25 °Ñ íà ñðåçû òîëùèíîé 30

ìêì, êîòîðûå çàòåì ïîìåùàþò íà

ïðåäìåòíîå ñòåêëî. Ïîñëå ýòîãî

ïðåïàðàòû âûíèìàþò èç ìèêðî-

òîìà, âûêëàäûâàþò íà ðàáî÷èé

ñòîë è ïîëíîñòüþ ïîêðûâàþò ðà-

ñòâîðîì ôîðìàëèíà ïðèìåðíî íà

30 ìèíóò. Ôîðìàëèí ãîòîâÿò, ðàç-

âåäÿ â ñîîòíîøåíèè 1:8 (100 ìë

37 % ð-ðà ôîðìàëüäåãèäà ðàçâîäÿò

â 800 ìë ïðîòî÷íîé âîäû). Çàòåì

ñðåçû ïðîìûâàþò îò ôîðìàëèíà â

âàííî÷êå ñ âîäîïðîâîäíîé âîäîé

îêîëî 2 ìèíóò, ìåíÿÿ âîäó ïîñëå

êàæäîãî îáðàçöà. Ïîñëå ýòî ñðåçàì

äàþò ïîäñîõíóòü ïðè êîìíàòíîé

òåìïåðàòóðå äî ïîëíîãî èñïàðåíèÿ

æèäêîñòè, îñòàâøåéñÿ ïîñëå ïðî-

ìûâêè, èëè èõ ïîäñóøèâàþò íà íà-

ãðåâàòåëüíîì ñòîëèêå ïðè òåìïåðà-

òóðàõ íå âûøå 60 °Ñ, íî â ýòîì

ñëó÷àå íàäî íå äîïóñòèòü èõ ïåðå-

ñûõàíèÿ. Òåïåðü ìîæíî ïðèñòóïàòü

ê îêðàñêå ñðåçîâ, íàïðèìåð ãåìà-

òîêñèëèíîì è ýîçèíîì.

Ïîñëå òàêîé ôèêñàöèè ñðåçîâ

îêðàñêà ïðåïàðàòà ïðîõîäèò áîëåå

ðàâíîìåðíî, ñðåç íå òåðÿåò ñâîþ

ïåðâîíà÷àëüíóþ ôîðìó, íå ñìîð-

ùèâàåòñÿ, íå óïëûâàåò ñî ñòåêëà â

âàííî÷êó ïîñëå ïðîìûâêè îò êðà-

ñîê, ÷òî î÷åíü âàæíî, îí íå äå-

ôîðìèðóåòñÿ ïðè äèôôåðåíöèà-

öèè êðàñêè è íå ðàñïëûâàåòñÿ ïðè

ïîñëåäóþùåì çàêëþ÷åíèè â ãëèöå-

ðèí-æåëàòèí.

Ìîäèôèöèðîâàííûé ìåòîä ïî-

çâîëÿåò íàìíîãî óëó÷øèòü êà÷å-

ñòâî ïîëó÷àåìûõ ïðåïàðàòîâ è, ÷òî

âåñüìà ñóùåñòâåííî, — ñîêðàòèòü

âðåìÿ îáðàáîòêè è, âñëåäñòâèå óâå-

ëè÷åíèÿ ðàçìåðà ïîëó÷àåìîãî îá-

ðàçöà, ñðîêîâ ïîñëåäóþùåãî èñ-

ñëåäîâàíèÿ. Ýòîò ìåòîä ïðèìåíèì

êàê äëÿ ñâåæåãî ìÿñà, ìÿñíûõ ïðî-

äóêòîâ, êîëáàñ, ñîñèñîê, ôàðøåé,

êîíñåðâíîãî ìÿñà, òàê è äëÿ çàìî-

ðîæåííîãî ñûðüÿ (ðèñ. 2).

Äëÿ áîëüøåé íàãëÿäíîñòè ðå-

çóëüòàòîâ ýòîãî ìåòîäà îáðàòèìñÿ

ê ðèñ. 3 è ðèñ. 4. Ïåðâûé ðèñóíîê

äåìîíñòðèðóåò êà÷åñòâî ïðåïàðàòà

ñòàðîé ìåòîäèêè ôèêñàöèè ñðåçà.

Ñðåç âûãëÿäèò ñìîðùåííûì, îò-

ñóòñòâóåò âèäèìàÿ ÷åòêàÿ ãðàíèöà

ìûøå÷íûõ âîëîêîí, â íåêîòîðûõ

ìåñòàõ êðàÿ ñðåçîâ íàêëàäûâàþòñÿ

äðóã íà äðóãà, âñå ýòî ïðèâîäèò ê

ïîÿâëåíèþ íåæåëàòåëüíûõ àðòå-

ôàêòîâ, à èíîãäà è ïðîñòî ê íå-

âîçìîæíîñòè äàëüíåéøåãî èññëå-

äîâàíèÿ.

Âòîðîé ðèñóíîê äåìîíñòðè-

ðóåò êà÷åñòâî ïðåïàðàòà ïðè èñ-

ïîëüçîâàíèè ìîäèôèöèðîâàííîãî

ìåòîäà. Ñðåç âûãëÿäèò ÷åòêèì, ñ

ðîâíûìè ãðàíèöàìè, íå ïðîèñõî-

äèò íàëîæåíèå êðàåâ äðóã íà äðóãà.

Îò÷åòëèâî âèäíû ãðàíèöû ìûøå÷-

íûõ âîëîêîí ïåðâîãî è âòîðîãî

ïîðÿäêà. Âñå ýòî íå ïðèâîäèò ê

ïîÿâëåíèþ àðòåôàêòîâ è äàåò

áîëüøå âîçìîæíîñòåé èññëåäîâà-

òåëþ, íàïðèìåð ìîæíî äåëàòü êà-

÷åñòâåííûå öèôðîâûå ñíèìêè.

Òàêèì îáðàçîì, ðàçðàáîòàííûé

íàìè óñêîðåííûé ìåòîä ïîçâîëÿåò

ïîëó÷èòü çíà÷èòåëüíî ëó÷øèå ðå-

çóëüòàòû, ïî ñðàâíåíèþ ñ òðàäè-

öèîííûìè ïîäõîäàìè. Ïðè ýòîì

íåîáõîäèìî ïåðåíåñòè ýòàï ôèê-

ñàöèè ñ íà÷àëüíîé ñòàäèè íà ñòàäèþ

ïåðåä îêðàøèâàíèåì, ÷òî äàåò âûè-

ãðûø â âèäå ñîêðàùåíèÿ îáùåãî

âðåìåíè îáðàáîòêè, óâåëè÷åíèÿ

ðàçìåðà ïîëó÷àåìûõ ãîòîâûõ ïðå-

ïàðàòîâ äëÿ àíàëèçà. Ðàíüøå ýòî

áûëî íåâîçìîæíî èç-çà ïîñòîÿííîé

ôëîòàöèè ñðåçà âî âðåìÿ îêðàøè-

âàíèÿ è íåðåäêîé ïîòåðè åãî ïåð-

âîíà÷àëüíîé ôîðìû. Ïîâûøàåìîå

êà÷åñòâî ãîòîâûõ ïðåïàðàòîâ ñîõ-

ðàíÿåòñÿ ïîñëå îêðàøèâàíèÿ è çà-

êëþ÷åíèÿ èõ ïîä ïîêðîâíîå ñòåêëî.

Íàèáîëåå ýôôåêòèâíî èñïîëüçî-

âàíèå âíîâü ðàçðàáîòàííîãî ìåòî-

äà ïðè ïðîâåäåíèè ðàáîò ñ ïðèìå-

íåíèåì ñîâðåìåííîãî ãèñòîëîãè-

÷åñêîãî êðèîîáîðóäîâàíèÿ äëÿ èç-

ãîòîâëåíèÿ ñðåçîâ ñ çàìîðîæåí-

íûõ îáðàçöîâ áèîëîãè÷åñêîãî ìà-

òåðèàëà, â òîì ÷èñëå ìÿñíîãî ñûðüÿ

è ìÿñíûõ ïðîäóêòîâ.

→

│

Рис. 2. Гистологические препараты,

полученные с помощью

модифицированного метода (слева)

и обычной обработки (справа)

Рис. 3. Замороженное мясо (Х 10)

Рис. 4. Замороженное мясо (Х 10)

лектронная Научная

СельскоХозя

йствен

ая Би

блиотека