ЭлБиб

THEORY AND PRACTICE OF MEAT PROCESSING

№4

| 2016

Проведенными ранее исследованиями показано,

что аорты

Sus scrofa

являются перспективным источ-

ником белково-пептидных веществ молекулярной

массой (Мм) от 100 кДа до 10 кДа, обладающих гипо-

липидемической, антиоксидантной активностями,

а также способствующих восстановлению функцио-

нирования эндотелиального слоя сосудов [6, 7].

Целью данного исследования являлось изучение

возможности применения методов

in vitro

для изуче-

ния биологической активности среднемолекулярных

и низкомолекулярных веществ, содержащихся в аорте

Sus scrofa

Материалы и методы

Объектами исследования являлись низкомолеку-

лярные (молекулярная масса менее 5 кДа) и среднемо-

лекулярные (молекулярнаямасса от 5 до30кДа) ультра-

фильтраты аорты

Sus scrofa

. Экстракт получали путем

экстрагирования измельченных аорт в изотоническом

физиологическом растворе (0,9% раствор натрия хло-

рида) на лабораторной диспергирующей установке

(Лаботекс, Россия) в течение 24 ч при 600 об/мин, тем-

пературе (2–5) °C, при соотношении сырье: экстрагент

1:5; отделение нерастворимого осадка проводили пу-

тем центрифугирования на центрифуге СМ-6М (Elmi,

Великобритания) в течение 8 мин при 3500 об/мин.

Получение ультрафильтратов с веществами молеку-

лярной массой менее 5 кДа (УФ<5кДа) и от 5 до 30 кДа

(УФ5-30кДа) производили путем фракционирования

экстракта на установке Vivaflow 200 (Sartorius, Гер-

мания) с использованием мембран из полисульфона

с диаметром пор 30кДа и 5 кДа. Полученные ультра-

фильтраты хранили при температуре минус (40) °C.

Концентрацию белка в экстрактах и ультрафильтра-

тах определяли биуретовым методом на фотометре

BioChem SA (HTI, США).

Исследование биологической активности полу-

ченных образцов проводили на эксплантатах тканей

сердца (n=40) и сосудов (n=40) 10-дневных куриных

эмбрионов и эксплантатах тканей аорты (n=30) старе-

ющих лабораторных крыс-самцов линии Wistar (450–

500 г). Куриные эмбрионы получали путем инкубиро-

вания яиц в условиях CO² — инкубатора (Lamsystems,

Россия) при 38,5 °С в увлажненной атмосфере и кон-

центрацией углекислого газа 5 %. Выделение фраг-

ментов тканей (эксплантатов) и все манипуляции

проводили в условиях асептики в ламинарном боксе

(Lamsystems, Россия).

Эксплантаты (около 1 мм

) помещали в чашки

Петри с коллагеновым покрытием (Thermo Fisher Sci-

entific, США), инкубировали 5–7 мин при 37 °С для

прикрепления эксплантатов, затем добавляли пита-

тельную среду с внесёнными исследуемыми образца-

ми в концентрации 100 нг/мл. Питательная среда для

эксплантатов тканей куриного эмбриона содержала

35 % раствора Игла, 25 % фетальной сыворотки телен-

Previous studies have shown that

Sus scrofa

aortas are

source of proteins and peptides with molecular weight

(Mw) of 100 kDa to 10 kDa with hypolipidemic and anti-

oxidant activities, as well as stimulating of recovery of en-

dothelial layer in blood vessels [6, 7].

The aim of the study was to evaluate the possibility of

vitro

methods implementation for investigation of the bio-

logical activity of the medium-molecular-weight and low-

molecular-weight substances contained in

Sus scrofa

aorta.

Materials and methods

Objects were low-molecular-weight (less than 5 kDa,

Mw) and medium-molecular-weight (5–30 kDa, Mw)

ultrafiltrates of

Sus scrofa

aorta. Minced aortas were ex-

tracted by isotonic physiological solution (0.9% NaCl so-

lution) on a laboratory dispersing equipment (Labotex,

Russia) for 24 hours at 600 rpm, temperature of 2–5 °C

and ratio of raw material:extractive agent 1:5. Insoluble

residue was separated by centrifugation on a centrifuge

CM-6M (Elmi, UK) for 8 min at 3500 rpm. The ultrafil-

trates with molecular weight less than 5 kDa (UF < 5 kDa)

and 5 to 30 kDa (UF 5–30 kDa) were obtained by frac-

tionation on a Vivaflow 200 (Sartorius, Germany) using

PES membranes with 30 kDa and 5 kDa pore diameters.

Obtained ultrafiltrates were stored at a temperature of

–40 °C. A protein concentration in extract and ultrafil-

trates was determined by biuret method on BioChem SA

analyzer (HTI, USA).

The biological activity was studied on explants of the

cardiac (n=40) and vessel (n=40) tissues of 10-day old

chicken embryos and on explants of the aortic tissues

(n=30) of aging laboratory male

Wistar

rats (450–500 g).

Chicken embryos were obtained by incubation of eggs in

incubator (Lamsystems, Russia) at 38.5 °С in wetted

atmosphere and 5% CO

concentration. Isolation of tissue

fragments (explants) and all manipulations were carried

out in aseptic conditions in a laminar box (Lamsystems,

Russia).

The explants (about 1 mm

) were transferred into Pe-

tri dishes coated with collagen (Thermo Fisher Scientific,

USA) and incubated for 5–7 min at 37 °С for explant ad-

hesion. Then, a culture medium with samples was added

in a concentration of 100 ng/ml. The culture medium for

the explants of the chicken embryo tissues contained 35%

of Eagle solution, 25 % of fetal calf serum, 35 % of Hanks’

solution, 5 % of chicken embryo extract, 0.6 % of glucose,

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека