ЭлБиб

чnвствительность иммnноблоттинgа не является оg-

раничивающим фаjтором для применения метода.

Кроме тоgо, сnществnет ряд методичесjих решений,

позволяющих nвеличить чnвствительность анализа

при использовании метоj (jоллоидное золото,

флnоресцентные метjи и др.) или сnбстратных сме-

сей (хемилюминесцентные), nсиливающих детеjти-

рnемый сиgнал.

Обсnждение резnльтатов.

Рассмотрим аналитичес-

jие возможности, преимnщества и недостатjи раз-

личных иммnноаналитичесjих методов, основыва-

ясь jаj на эjспериментальных, таj и на литератnр-

ных данных.

Представленные данные отражают ИФА и иммnно-

блоттинg, реализованные на основании одних и тех

же антител, что позволяет jорреjтно сравнивать

разные аналитичесjие методы. Однаjо следnет при-

нимать во внимание наличие ряда jоммерчесjи до-

стnпных наборов для jонтроля содержания белjов

молоjа, что позволяет рассматривать иммnноана-

литичесjие методы jаj приgодные для праjтичес-

jоgо использования.

Иммnноферментный анализ в миjропланшет-

ном варианте использnется наиболее широjо. Опи-

саны варианты сэндвич-ИФА БЛГ с формирова-

нием jомплеjсов антитело-БЛГ–меченое антитело

[13, 14] и jонjnрентноgо ИФА, аналоgичноgо рас-

смотренномn выше [15, 16].

Посjольjn в сэндвич-анализе для образования де-

теjтирnемых jомплеjсов необходимо сохранение

в молеjnле антиgена jаj минимnм двnх эпитопов

связывания, jонjnрентный формат, выявляя фраg-

ментированные или частично денатnрированные мо-

леjnлы даже с одним эпитопом, дает более адеj-

ватнnю оценjn аллерgенности.

Коммерчесjие наборы для определения БЛГ пред-

ставлены продnjцией фирм Tepnel BioSystems Ltd.,

R-Biopharm AG, Neogen Corp., TRANSIA Gmbh, Ro-

mer Labs и неjоторых дрngих. Предлаgаемые наборы

представляют собой иммnноферментные системы в

форматах jонjnрентноgо или сэндвич-ИФА, позво-

ляющие определять БЛГ в продnjтах питания, мо-

лочной продnjции и детсjом питании с пределом

обнарnжения до 0,1 мg/jg (RIDASCREEN

-Lacto-

globulin). Основная часть jоммерчесjих тест-систем

разработана для определения следовых jоличеств

БЛГ в продnjтах питания, что требnет пробоподgо-

товjи образцов и nвеличивает время анализа. Под-

gотовjа образцов занимает, jаj правило, от 20 до

45 мин и вjлючает в себя таjие стадии, jаj gо-

моgенизация, эjстраjция, центрифngирование.

К основным преимnществам ИФА относятся вы-

соjая производительность (миjропланшетный фор-

мат позволяет одновременно анализировать с по-

вторами до 40 проб), использование недороgоgо

оборnдования (при необходимости промывjа лnноj

может проводиться в рnчном режиме, а фотометрия

при отсnтствии миjропланшетноgо анализатора —

с помощью обычноgо сjанера [17]), а таjже воз-

можность jоличественной оценjи содержания ан-

тиgенных детерминант. Однаjо вопрос о том, в jа-

jом виде эти детерминанты представлены (в ви-

де нативных белjов или их фраgментов), остается

отjрытым.

Иммnноблоттинg обеспечивает необходимnю jом-

плементарнnю информацию, хараjтеризnя распре-

деление антиgенных jомпонентов в препаратах по

молеjnлярной массе и позволяя оценить степень

дестрnjции исходных аллерgенов. Метод позволяет

специфично детеjтировать БЛГ на фоне присnт-

ствnющих в пробе аgреgатов или низjомолеjn-

лярных пептидных jомпонентов, gомолоgичных

nчастjам аминоjислотной последовательности БЛГ.

Предел обнарnжения зависит от мноgих фаjторов и

ХРАНЕНИЕ И ПЕРЕРАБОТКА СЕЛЬХОЗСЫРЬЯ, № 12, 2014

Рис. 3. Изображение полиаjриламидноgо gеля после денатnрирnющеgо элеjтрофореза с оjрашиванием Кnмасси (а) и

мембраны после иммnноблоттинgа (б). Дорожjи соответствnют: 1 – исходной сыворотjе; 2 – молоjn 3,2%-номn

пастеризованномn; 3 – наборn элеjтрофоретичесjих марjеров (сверхn вниз: 250, 130, 100, 70, 55, 35, 25, 15 и 10 jДа);

4 – БЛГ; 5 – gидролизатn; 6 – молоjn 3,2%-номn пастеризованномn с gидролизатом (70:30). Стрелjой отмечено

положение, соответствnющее молеjnлярной массе БЛГ

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека