ЭлБиб

20 / 76

18 ХРАНЕНИЕ И ПЕРЕРАБОТКА СЕЛЬХОЗСЫРЬЯ, № 12, 2014
боров, требnющих наgревания по 37 °С. При этом
продолжительность jонjnрентной стадии соjраще-
на до 30 мин, а сnммарное время определения со-
ставляет 1,5 ч.
Конjnрентные jривые для молоjа, jонцентрата
сывороточных белjов, полnченноgо методом nльтра-
фильтрации, и еgо gидролизата [12] представлены на
рис. 1, б.
Содержание БЛГ в пробах рассчитывали по jали-
бровочной jривой (см. рис. 1, а). Таj, например, раз-
бавленная в 20000 раз проба jонцентрата сыворо-
точных белjов дает при тестировании в ИФА опти-
чесjnю плотность 0,43 опт. ед., jоторой на jалибро-
вочной jривой соответствnет jонцентрация БЛГ, рав-
ная 0,6 мjg/мл. Следовательно, содержание БЛГ в не-
gидролизованном jонцентрате составляет 12 мg/мл.
Аналоgичные расчеты для gидролизата поjазали,
что содержание в нем БЛГ составляет 0,35 мg/мл.
Методиjа хараjтеризnется точностью определе-
ния +7 % и позволяет оценить остаточнnю аллер-
gенность на основании сравнения содержания БЛГ
в препарате и в исходном сырье. В сочетании с со-
ответствnющей пробоподgотовjой ИФА позволяет
таjже тестировать jонечные gипоаллерgенные про-
дnjты — jефир, йоgnрт, твороg, мnсс и др.
Элеjтрофорез и иммnноблоттинg.Для препаратов,
полnченных в ходе тоgо же циjла обработjи молоч-
ноgо сырья, был проведен элеjтрофорез в денатnри-
рnющих nсловиях. На рис. 2 представлены денсито-
gраммы полnченных белjовых профилей. Минималь-
ная интенсивность полосы, соответствnющей БЛГ,
наблюдается в пробе д (gидролизат). Сnщественное
снижение интенсивности в зоне лоjализации БЛГ
для пробы g отражает наличие в ее составе gидро-
лизата сыворотjи.
Изменение содержания БЛГ в ходе обработjи, ха-
раjтеризnемое по площади пиjа денситоgраммы, со-
ответствnет данным, полnчаемым при иммnнофер-
ментном определении.
Идентифиjация элеjтрофоретичесjих белjовых
полос (рис. 3, а) проводилась с использованием спе-
цифичных j БЛГ антител. Рис. 3, б демонстрирnет
связывание антител с БЛГ jаj в нативных молочных
продnjтах (дорожjа 1, 2), таj и в продnjтах после
gидролиза (дорожjа 6).
Глnбоjий gидролиз jонцентрата белjов молочной
сыворотjи приводит j образованию большоgо jоли-
чества свободных аминоjислот и jоротjих пепти-
дов, jоторые не распознаются антителами j БЛГ
(рис. 3, дорожjа 5).
Предел обнарnжения БЛГ, достиgаемый при
иммnноблоттинgе молочных продnjтов, составляет
3,0 мjg/мл, что выше предела обнарnжения в им-
мnноферментном анализе.
Принимая во внимание высоjое содержание БЛГ
в молочных продnjтах, для большинства образцов
100
80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100
1
е
100
80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100
1
а
100
80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100
1
б
100
80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100
1
в
100
80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100
1
g
100
80
60
40
20
0
0 20 40 60 80 100
1
д
Рис. 2. Элеjтрофоретичесjие денситоgраммы с оjрашиванием Кnмасси, полnченные для молоjа и молочных продnjтов
(цифрой 1 отмечены области, соответствnющие положению БЛГ): а – исходная сыворотjа; б – молоjо 3,2%-ное
пастеризованное; в – молоjо 3,2%-ное пастеризованное с исходной сыворотjой (70:30); g – молоjо 3,2%-ное
пастеризованное с gидролизатом (70:30); д – gидролизат; е – раствор БЛГ. Для всех gрафиjов ось абсцисс – jоординаты
пиjа (отн. ед.), ось ординат – интенсивность сиgнала (отн. ед.). Заштрихованные nчастjи соответствnют площади пиjа,
определяемой jаj сиgнал БЛГ
Электронная Научная СельскоХозяйственная Б блиотека