ЭлБиб

СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ УПРАВЛЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИМИ РЕСУРСАМИ ЖИВОТНЫХ

463

ра) раствором, близким к физиологической

осмомолярности;

• добавляется подходящий криопротектор –

наиболее часто используется глицерол, однако

большой практический интерес, в зависимости

от вида, представляют диметил сульфоксид

(DMSO), диметилацетамид (DMA) или диметил-

формамид (DMF);

• разбавленное семя охлаждается, готовятся

дозы и затем замораживаются в жидком азоте

(-196 °C);

• индивидуальные дозы семени обычно за-

мораживают в соломинках, а не в гранулах,

для обеспечения оптимальных санитарных

условий и идентификации каждой дозы.

Ежегодно после ИО замороженной и разморо-

женной спермой общая степень оплодотворяемости

у впервые осеменяемых телок составляет 50–65%

из более 110 миллионов; у свиней – 70–80% из бо-

лее 40 миллионов; у коз – 50–80% (внутриматоч-

но) или 55–65% (цервикально) из более 120 000;

у овец – 50–80% (внутриматочно) или 55–60%

(цервикально) из более 50 000; и у лошадей – 35–

40% из более 5 000 (Ericksson и др., 2002; Thibier,

2005; G. Decuadro, персональное сообщение, 2005).

Результаты ИО у кур существенно варьируют как

между породами, так и внутри пород, в пределах

от 10% до 90% (Brillard, Blesbois, 2003).

Число сохраняемых доз спермы является функ-

цией числа доз, необходимых для получения одного

потомка, ожидаемой продолжительности продуктив-

ной жизни повторно оплодотворяемых плодовитых

самок, и числа самок и самцов, желательных для

восстановления популяции. Если семя используется

для восстановления пород путем возвратных скрещи-

ваний, некоторый процент генов популяции самок,

использованных в возвратных скрещиваниях, будет

оставаться у восстановленной породы. Например,

для получения животных, несущих более 95% генов

породы, сохраняемой в виде замороженного семени,

необходимо пять поколений возвратных скрещива-

ний. Должно сохраняться достаточное количество

семени для того, чтобы обеспечить требуемое число

поколений возвратных скрещиваний. У птиц сам-

ки несут ZW гетерохромосомы (самцы ZZ), поэтому

гены, локализованные в W хромосоме, не могут быть

переданы стандартной процедурой криосохранения

семени. Более того, у всех видов могут быть поте-

ряны или изменены некоторые цитоплазматические

эффекты донорской породы. Несмотря на эти ограни-

чения, метод следует рассматривать как основной в

сохранении ГРЖ

ex situ in vitro

из-за доступности этой

перспективной и надежной технологии и легкости ее

применения. Однако, если малó число доз, получае-

мых от одного самца, или число самок, которые могут

быть получены от одной матки, восстановление по-

роды путем трансплантации эмбрионов (где это воз-

можно) более желательно, т.к. этот способ обеспечи-

вает полное восстановление исходных генов.

Ооциты

Несмотря на интересные технические разработки, у

птиц до сих пор не удалось успешно получать живых

цыплят из замороженных и оттаянных яиц. Это объяс-

няется, частично, огромным количеством липидов в

яичном желтке. Напротив, эмбрионов некоторых ви-

дов сельскохозяйственныхмлекопитающихможно по-

лучить

in vitro

из зрелых ооцитов, выделенных из яич-

ников умерщвленных и живых самок. Такие ооциты

могут длительное время храниться в замороженном

виде до оплодотворения

in vitro

(

in vitro

fertilization,

IVF) для получения эмбрионов. В зависимости от ско-

рости замораживания можно выделить два метода.

Медленные процедуры замораживания в настоящее

время применяются у крупного рогатого скота и по-

тенциально применимы у овец и коз, но успешность

получения потомства остается чрезвычайно низкой

(меньше 10%). Частично это является результатом

низкой успешности трансплантации эмбрионов и вы-

сокой смертности эмбрионов после оплодотворения.

Более того, такие методики, требующие созревания

ооцитов до IVF, должны выполняться высоко квали-

фицированным техническим персоналом. В настоя-

щее время экспериментально разработаны сверхбы-

стрые процедуры замораживания, называемые также

витрификацией, для снижения уровня повреждений

ооцитов, возникающих в результате охлаждения или

токсичности криопротекторов. В большинстве про-

токолов используют высокие концентрации криопро-

текторов и сахаров для удаления воды из клетки. Это

ограничивает внутриклеточное формирование льда

и, следовательно, предупреждает повреждение ооци-