229 / 294
при переопылении растений-регенерантов R
2
3 * 21.1 и21.1 * 3 ,в по
томстве которых более 80 % растений имели балл поражения
1
в пря
мой комбинации и 1-3 в обратной. Среди растений R
2
клевера лугового
нами были получены семьи, контрастные по признаку устойчивости к
раку. У одних, частота растений, выживших после инокуляции патоге
ном в искусственных условиях, составляла 86,2-96,4, а у других — 2,1—
6
,
8
. Всего в искусственных условиях нами было проанализировано
12 семей, из них 3 семьи были высокоустойчивы; 4 — высоковосприим
чивы и 5 — занимали промежуточное положение по устойчивости (час
тота выживших растений составляла 39,4-51,2 %).
Таким образом, результаты исследований по клеточной селекции
клевера лугового на устойчивость к раку показали, что культивируемые
in vitro
клеточные популяции различаются по признаку устойчивости
к КФ. Создавая селективные условия, можно отобрать устойчивые к КФ
клеточные линии и получить устойчивые к раку растения-регенеранты.
Получение форм клевера лугового с повышенной устойчивостью
к болезням методом генетической трансформации
Как отмечалось ранее, основой получения форм клевера лугового
с повышенной устойчивостью к болезням методом клеточной селекции
является высокая гетерогенность исходных суспензионных клеточных
культур и, как следствие, большая сомаклональная изменчивость по ря
ду морфологических и физиологических признаков, как в положитель
ную, так и в отрицательную сторону по сравнению с исходным геноти
пом.
В связи с этим был разработан способ направленного создания
методом генетической трансформации форм клевера лугового с одним
из целевых признаков (устойчивость к болезням, вредителям и др.) и
сохраняющих при этом все ценные селекционные признаки исходного
образца.
Для генетической трансформации использовали генотипы клевера
лугового сортообразца Ранний 2 с высокой PC и показавшие высокую
устойчивость к ионам алюминия при оценке
in vitro
, в вегетационном и
полевом опытах.
В опытах использовали штамм
Agrobacterium tumefaciens LGV
3850
и штамм
A. rhizogenes А4
, содержащие векторные плазмиды
рК22ас
и
pK22rs
с маркерным геном
np tll
(целевые гены
ас-ар
и
rs-ap
—гены синтеза дефензинов амаранта и редьки, повышающие устойчи
вость к корневым гнилям). Морфогенные культуры, инокулированные
агробактериями, помещали на агаризованную среду Гамборга В
5
с
2 мг/л БАП и добавлением 50 мг/л канамицина (селективного фактора
226
Научная электр нная библиотека ЦНСХБ