232 / 294
6
. Кислотоустойчивость трансгенных морфогенных культур клевера лугового
Показатели устойчивости к 50 мг/л
А 1 3+
Средняя масса, мг/%
Средняя длина, мм/%
Генотип
побегов
корней
побегов
корней
исход- транс- исход- транс- исход- транс- исход- транс-
ных генных ных генных ных генных ных генных
A 4 r s K 7 1 1-2
41.0
100.0
64,0
156,9
110,0
100,0
120,0
109,9
15.0
100.0
15.0
100.0
90.0
100.0
100,0
111,1
A 4 r s 2 1 1
26.0
36.0
55.0
95.0 20.0
25.0
70.0
80.0
100,0 138,5 100,0 172,1 100,0 125,0 100,0 114,3
L G V a c l5 IT
31.0
41.0
55.0
85.0 40.0
50.0
10.0
15.0
100,0 132,2 100,0 154,6 100,0 125,0 100,0 150,0
L G V a c 2
64.0
71.0
30.0
75.0 45.0
51.0
50.0
70.0
100,0 110,9 100,0 250,0 100,0 113,5 100,0 140,0
чалось у клонов
A4rs211
(на 93,4 %). Средняя масса побегов трансген
ных клонов превышала таковую исходных образцов у трех генотипов
A4rsK7 11-2, A4rs21InLGVacl5ITua
56,9; 38,5 и 32,2 % соответственно.
Таким образом, полученные данные, и в том числе по способно
сти к ризогенезу изученных клонов на селективной среде, свидетельст
вуют о сохранении признака кислотоустойчивости растениями-
регенерантами в процессе генетической трансформации.
Разработанный способ генетической трансформации растений се
лекционно-ценных образцов клевера лугового позволил получить рас
тения-регенеранты со встроенными генами — маркерным (канамицину-
стойчивость) и целевым (ген синтеза дефензина амаранта, повышающе
го устойчивость растений к корневым гнилям).
Использование для ПЦР-анализа ДНК, выделенной из листовой
ткани асептических растений-регенерантов, образовавших корни на
среде с 50 мг/л канамицина, позволило выявить трансгенные растения
на более ранних этапах культивирования до высадки в почву.
Кроме того, использование при генетической трансформации спо
соба прямой регенерации растений, исключающего возникновение со-
маклональной изменчивости, позволило:
1
) сохранить селекционно
ценные признаки исходного образца (кислотоустойчивость),
2
) поддер
живать в культуре ш
vitro
более 50 пассажей трансгенные морфогенные
культуры с высокой регенерационной способностью, 3) получить неог
раниченное количество трансгенных растений-регенерантов.
229
Научная электронная библиотека ЦНСХБ