ЭлБиб

клонообразования отмечали на 3-7-е сутки после слияния.

Первичный скрининг моноклональных антител проводили

методами непрямого гистохимического (ГХ) и твердофазного

(ТФ) ИФА, которые в перспективе предполагается использовать

как методы диагностики оспы овец на основе разработанных им*

мунореагентов. Для ТФ ИФА использовали нормальный антиген

культуры клеток ПО и культуральный антиген вируса оспы овец,

полученные в этой же культуре клеток. Скрининг МКА в ГХ

ИФА проводили на 96-луночных панелях с нормальной и инфи

цированной ВОО штамм НИСХИ

(5,0 lg ТЦД

см3) перевивае

мой культурой клеток ПО, фиксированной на 3-и сутки охлаж

денным 80%-ным ацетоном в течение

мин с последующим вы

сушиванием. Связавшиеся с антигеном МКА в ТФ и ГХ ИФА

выявляли с помощью кроличьего антимышиного пероксидазного

конъюгата.

В результате первичного скрининга в ГХ и в ТФ ИФА было

обнаружено 9 клонов гибридом, секретирующих МКА, которые

вступали в реакцию с антигеном вируса оспы овец и не реагиро

вали с антигеном незараженной культуры клеток. Клетки клони

ровали в полужидком агаре двукратно, что оказалось достаточно

для получения при втором клонировании

1 0 0

% секретирующих

соответствующие специфические МКА субклонов. Клетки нара

щивали и вводили внутрибрюшинно взрослым мышам линии

BALB/c, которым предварительно (за 3 -7 дней) внутрибрю

шинно был введен неполный адъювант Фрейнда в объеме

0,5

мл

на мышь.

Асцитические жидкости отбирали через 8-12 дней после

введения клеток. Моноклональные иммуноглобулины из иммуно-

асцитической жидкости высаливали сульфатом аммония при

50%-ном насыщении и очищали гельхромотографией на сефа-

дексе G-25. Активность МКА в непрямом методе ГХ ИФА и не

прямом методе ТФ ИФА указана в таблице. Полученные моно

клональные иммуноглобулины конъюгировали с пероксидазой

хрена по методу Wilson и Nakane. Данные по активности полу

ченных пероксидазных конъюгатов в прямом методе ГХ ИФА

представлены в таблице.

Таким образом, нами получено 9 клонов гибридных клеток,

стабильно продуцирующих МКА, обладающих специфичностью к

антигенным детерминантам структурных полипептидов вируса

оспы овец. В настоящее время ведется работа по созданию на их

148

Науч ая электронная библиотека ЦНСХБ