ЭлБиб

SPF эмбрионов в возрасте 10 дней инфицировали в желточный

мешок штаммом Calnek 1143 дозой 10

5’8

ЭИД

в 0,2мл. На 3-й,

4-й, 5-й,

-й день после инокуляции наблюдали по одному по

гибшему эмбриону. На 9-й день после заражения у оставшихся в

живых эмбрионов (в возрасте 19 дней) при вскрытии не отмети

ли никаких видимых отличий по сравнению с контрольными не-

зараженными. В ПЦР исследовали мозг, тушки и желток эм

брионов как 19-дневных, так и погибших на З-й-

-й день после

заражения. Вирусный геном обнаружили во всех инфицирован

ных эмбрионах, за исключением незаряженных контрольных.

Применение гнездовой ПЦР позволило не только выявить вирус,

но и в некоторой степени получить представление о характере

его размножения и приблизительно оценить его количество. Так,

на 3-й день после заражения вирус присутствовал в желтке,

тушке и мозге эмбриона, и, поскольку обнаружить его удалось

лишь после двух этапов ПЦР, его содержание в этих органах не

превышало

1 0 3

ЭИД

р/мл. На 9-й день после заражения количе

ство вируса в желтке не изменилось, в то время как уровень на

копления вируса в мозге и тушке возрос настолько, что его

можно было выявить уже после ПЦР-1, что превышает

ЭИД50/ мл.

Методом гнездовой ПЦР также установили присутствие генома

вируса НЭП у переболевшего молодняка. При испытании живой

вакцины на 30-дневных цыплятах из хозяйства у одного из них в

ходе эксперимента наблюдали характерные признаки болезни,

исчезнувшие через 7 дней. На 3-й день после выздоровления цы

пленка его внутренние органы проанализировали в ПЦР. Вирус

ный геном обнаружили в головном мозге, железистом желудке и

поджелудочной железе, тогда как в селезенке, печени и двена

дцатиперстной кишке вирус отсутствовал.

Таким образом, разработанная нами система праймеров для

гнездовой ПЦР позволяет выявлять геном вируса НЭП в инфи

цированных биологических объектах, в частности, контролиро

вать развитие вируса в процессе его культивирования на кури

ных эмбрионах. Тест-система также может быть использована

для предварительной оценки титра вакцинного штамма вируса,

поскольку установлена корреляция между ПЦР и титрованием

на куриных эмбрионах, причем исследование методом ПЦР за

нимает гораздо меньше времени, чем титрование на куриных эм

брионах.

145

Н учная электронная библиотека ЦНСХБ