ЭлБиб

ТЦД

о / мл хранился в металлических сосудах объемом 30 л при

температуре -20°С. Условия замораживания - размораживания

и хранения проводились соответственно регламенту, взятому из

крупномасштабного производства вируса ящура. Анализируя си

туацию, выяснили, что замораживание и размораживание вирус

ного материала происходили очень медленно вследствие большо

го объема сосуда, его цилиндрической формы и недостаточно

низкой конечной температуры, которая редко была ниже -20° С.

При таких условиях хранения начинают действовать следующие

факторы: во-первых, образуется крупнокристаллический лед, ко

торый чисто механически деформирует любые органические мак

ромолекулы; во-вторых, при медленном замораживании и размо

раживании между каналами льда образуются гипертонические

растворы с крайними значениями ионной силы и pH среды, а

длительная экспозиция вируса, имеющего довольно сложную

структуру, ведет к денатурации протеиновой оболочки и нуклео-

капсида вирионов; в третьих, в крупных холодильных камерах

температура редко бывает ниже —20°С, а порой она колеблется

от

- 8

до -20°С. В диапазоне этих температур при длительном

хранении происходят рекристаллизационные процессы, которые

ведут к инактивации любых вирусов.

Исходя из этих предпосылок, мы решили стабилизировать

некоторые технологические этапы получения антирабической

вакцины в производственных объемах.

На первом этапе мы выращивали

пассаж мозгового вируса

(с титром инфекционности не менее 7,5 lg ТЦДзо/мл) в клетках

ВНК-21 в течение 48 часов в объеме 10 л. Вирусную суспензию

расфасовывали в клинские матрасы по

л и быстро заморажи

вали до -32°С. Этот вирус проверяли на титр инфекционности и

использовали в следующих этапах. Замороженную суспензию

размораживали в теплой воде и инокулировали в культиватор

КС-40 с объемом суспензии 30 л и концентрацией в

млн. кле

ток в мл. При нормальных условиях культивирования клетки

вырастали до 2± 0,2 млн. в мл. На этом этапе вирус не прове

ряли на титр инфекционности, а сразу загружали в реактор КМ-

2000 в объеме до 1600 л клеточной суспензии ВНК-21 с концен

трацией от 0,5 до 1 млн. в мл. Через 48 часов культивирования

вирусную суспензию ставили на инактивацию. При такой техно

логической схеме мы получали на конечном этапе вирусную су-

150

Научная электронная б блиотека ЦНСХБ