ЭлБиб

338

1. Рационы коров

Хозяйство

Состав рациона, кг

Сено

Силос

Комбикорм

Кукуруза

экструдиро-

ванная

Патока

Премикс

Плющенное

зерно

Картофель

Дробина

Жом свек-

ловичный

Здоровые

коровы

«Большевик»

№ 1342, № 1241,

№ 1030, № 1352 2 35 6 —

1,5

—

6 2

Выбракованные

коровы

№ 1229, № 452

«Раздолье»№ 1415 3 25 9 1

—

«Приневское»

№ 4036

2 35 3,5 — 1

—

«Детскосель-

ский» № 1415 1 35 5 — 1

—

«Кобраловский»

№ 4036, № 1297 2 35 5 —

0,5 0,3 —

—

ДНК из 0,5 мл рубцовой жидкости выделяли экстракцией

фенолом/хлороформом и очисткой раствором CTAB. ПЦР–

амплификацию генов 16S pРНК бактерий проводили с исполь-

зованием праймеров: 63F (CAGGCCTAACACATGCAAGTC)

— с меткой на 5’–конце (флуорофор D4 — WellRed); универ-

сальный праймер 1492R (TACGGHTACCTTGTTACGACTT).

Амплифицированный фрагмент выделяли из агарозного геля

помощью 3М раствора гуанидина тиоционата. Рестрикцию ам-

пликонов проводили с помощью рестриктаз HaeIII, HhaI и

MspI («Fermentas»), в течение двух часов при 37 °С. После

окончания рестрикции ДНК из реакционной смеси осаждали

этанолом, растворяли в SLS (Beckman Coulter) с добавлением

маркера молекулярного веса — 600 п. н. (Beckman Coulter) и

разделяли в условиях капиллярного электрофореза с флуорес-

центной детекцией с использованием автоматического секве-

натора CEQ8000 (Beckman Coulter). Вычисление размеров пи-

ков и их площади проводили с использованием программного

блока Fragment Analysis (Beckman Coulter). Для идентифика-

ции пиков T–RFLP-граммы для трех эндонуклеаз (

Hae

III,

Hha

Электронная Научная Сельс

оХозяйственная Библиотека