ЭлБиб

МасложироваЯ промышленность

№ 1-2015

пальмовое масло

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

тативного гидролиза проводили

в пробирках типа эппендорф, по-

мещенных в шейкер-инкубатор,

в течение 15 мин, после чего

прерывали реакцию добавлени-

ем 50 мкл фосфорной кислоты

(85%), центрифугировали реак-

ционную смесь в течение 10 мин

при 10000 g и свободный от три-

бутирина водный слой анализи-

ровали на газовом хроматогра-

фе Кристалл-5000.2 с пламенно-

ионизационным детектором (ко-

лонка Хромосорб 102, 3 м

3 мм).

Активность липаз вычисляли

по формуле

где А — активность фермента,

TBU/мг;

изм

(С

) — измеренная концен-

трация масляной кислоты, мМ;

(С

) — измеренная концентра-

ция масляной кислоты в контроль-

ном опыте, мМ;

инкуб

— время инкубирования об-

разца, мин;

препарата

— масса внесенного

твердого образца или масса вне-

сенного с раствором фермента, мг;

эпп

— конечный объем раствора

в пробирке типа эппендорф.

Сохранение активности фермен-

та после иммобилизации вычисля-

ли по формуле

где

— степень сохранения актив-

ности липаз при иммобилизации,

% отн.;

— активность исходной липа-

зы;

А2 — активность полученного

биокатализатора;

кат

— масса полученного биока-

тализатора;

фермента

— масса исходного фер-

мента, взятого для иммобилизации.

Содержание твердой фазы в ре-

акционной смеси анализирова-

ли методом ЯМР-релаксометрии

на приборе Протон-20М (Хроматэк,

Россия). После проведения переэ-

терификации реакционную смесь

центрифугировали и переносили

в ЯМР-пробирки для исследования

показателей плавления полученных

смесей. Кривые плавления масло-

жировых смесей получали путем

измерения содержания твердых

компонентов пробы при различных

температурах. Для этого пробирки

с образцами нагревали до полного

плавления масложировой смеси,

охлаждали при +1 °С в течение 3 ч

и затем термостатировали в ста-

кане с водой объемом 1000 мл

при различных температурах в те-

чение 20 мин, определяя после

каждого термостатирования содер-

жание твердых компонентов.

Результаты определения актив-

ности исходных и иммобилизиро-

ванных липаз, приведенные в та-

блице, выявили близкие значения

степени иммобилизации с исполь-

зованием испытанных способов им-

мобилизации для каждой из 9 ис-

пользованных липаз.

Помимо степени иммобилиза-

ции для изучения эффективности

иммобилизации целесообразно

рассматривать также степень со-

хранения активности фермента

по сравнению с исходной липазой.

Сохранение активности иммоби-

лизованных липаз является отно-

сительной величиной и определя-

ется по отношению к активности

такого же количества исходного

фермента в свободном состоя-

нии. Степень иммобилизации и со-

хранение активности являются

взаимодополняющими параме-

трами, так как отражают различ-

ные аспекты процесса иммоби-

лизации. Сохранение активности

липаз, как видно из таблицы, де-

монстрирует различное токсичное

влияние применяемых реагентов

для ковалентной иммобилизации

для большинства исследуемых

ферментов. Так, например, для ли-

пазы Rhizopus oryzae наблюдаются

очень близкие значения сохране-

ния активности при иммобилиза-

ции с помощью глутарового аль-

дегида и водорастворимого кар-

бодиимида EDC, тогда как для ли-

паз

Wheat

germ

Aspergillus

oryzae

Candida

antarctica

значения

сохранения активности указан-

ными реагентами различаются

почти в два раза. Такая неодно-

родность представляется инте-

ресным фактом, учитывая, что оба

реагента взаимодействуют с ами-

ногруппами фермента. Вероятно,

1‑этил-3- (3‑диметиламинопропил)

карбодиимид и глутаровый аль-

дегид проявляют селективность

Липаза

Носитель

Активность,

TBU/мг

Степень

иммобилизации, %

Сохранение

активности, %

Lipase from Pseudomonas

fluorescens

Chromaton

0,128

70,5

14,9

Lewatite

0,202

77,7

23,5

Lipase from Rhizopus

oryzae

Chromaton

0,125

69,1

21,2

Lewatite

0,108

72,2

18,4

Lipase from wheat germ

Chromaton

0,033

63,2

19,1

Lewatite

0,058

64,3

33,3

Lipoprotein Lipase from

Burkholderia sp.

Chromaton

0,182

62,3

16,5

Lewatite

0,240

58,6

21,8

Lipase B Candida

antarctica, from

recombinant Aspergillus

oryzae

Chromaton

0,111

67,7

13,5

Lewatite

0,200

64,5

24,2

Lipase from Candida

rugosa

Chromaton

0,117

57,1

35,0

Lewatite

0,085

62,5

25,5

Lipase from Mucor

javanicus

Chromaton

0,068

53,9

21,7

Lewatite

0,060

64,6

16,6

Lipase from Penicillium

roqueforti

Chromaton

0,051

59,6

28,9

Lewatite

0,038

65,2

21,7

Lipase from Aspergillus

oryzae

Chromaton

0,168

81,2

14,3

Lewatite

0,302

86,4

25,6

Результаты иммобилизации различных липаз ковалентным методом

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека