ЭлБиб

164

НАУКА

ПРОИЗВОДСТВУ

1,5мМ. Константа Михазлиса для ТМФ, рассчитанная в координатах

Хейнса, составляла 0,25 мМ.

___________

Литература

1. Ishii К., Sarai K.sSanemori Н., Kawasaki TV/ J. Nutr. Sci. Vilaminol. 1979. Vol. 25. P.

517-523.

2. Ogawa K., Ago Y„ Tanaka T. // Thiamine. NY., 1976. P. 176-190.

3. Ogawa K., Sakai M , Inomata К .// Ann NY Acad Sci. 1982. Vol. 378. P. 188-214.

4. Penttinen H.//Anal. Biochem. 1980. Vol. 102. P. 353-357.

УДК 577.152.3

Гуляй И.Э.-ИБХНАНБ

СОЛЮБИЛИЗАЦИЯ ТИАМИНТРИФОСФАТАЗЫ ИЗ

МЕМБРАН ПОЧЕК БЫКА

Тиаминтрифосфатаза (ТТФаза) катализирует гидролиз тиамин-

трифосфата с образованием тиаминдифосфата и неорганического фос

фата. ТТФазная активность обнаружена в различных органах и тканях

животных [1,2]. Исследования внутриклеточного распределения актив

ности свидетельствуют о присутствии двух различных ферментов, ло

кализованных в цитозольной фракции (растворимая ТТФаза) и мем

бранных структурах клетки. Было показано, что цитозольный белок

представляет собой истинную ТТФазу, обладающую абсолютной спе

цифичностью к субстрату [3]. Природа мембранной ТТФазы неизвест

на, поскольку в мембранах содержатся фосфатазы с широкой специ

фичностью, способные катализировать гидролиз различных фосфор

ных эфиров, в том числе и ТТФ. Основная трудность в идентификации

мембранно-связанного белка с ТТФазной активностью состоит в его

инактивации в процессе выделения из мембран и низкой стабильности

растворимого препарата.

Цель настоящей работы заключалась в экстракции ТТФазы из

мембран почек быка с использованием детергентов и в исследовании

влияния солюбилизации на ее функциональную активность.

ТТФазную активность определяли по количеству образующегося

в реакции тиаминдифосфата. Для солюбилизации фермента мембраны

гомогенизировали в трис-HCi буфере (50 мМ, pH 7.5), содержащем 0,1

мМ феншшетилсульфонилфторид, 1 мг/мл йодацетамид, 1% детергент,

и центрифугировали 60 мин при 105000g. Степень солюбилизации, оп-

Электронн я Научная СельскоХозяйственная Библиотека