ЭлБиб

160

НАУКА

ПРОИЗВОДСТВУ

УДК 577Л52.3

Лучко Т.А. - ИБХ НАН Б

РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ С

НУКЛЕОЗИДДИФОСФАТАЗНОЙ И

ТИАМИНДИФОСФАТАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ИЗ

ПОЧЕК БЫКА

Гидролиз тиаминдифосфата (ТДФ) осуществляется гомогенатами

различных органов и тканей животных. Био- и гистохимические иссле

дования распределения ТДФазной активности выявили ее локализацию

в мембранных структурах клетки [1,2]. Результаты этих исследований

свидетельствуют об индивидуальной природе ферментов, катализи

рующих реакцию гидролиза ТДФ в различных внутриклеточных орга-

неллах и мембранных системах. Было показано [3,4], что ТДФаза,

очищенная из печени быка и крысы идентична микросомальной нук-

леозиддифосфатазе (НДФаза), представляющей собой белок с молеку

лярной массой 130 кДа, оптимум активности с ИДФ при pH 7,0, акти

вируемой АТФ и проявляющей ТДФазную активность только в щелоч

ных условиях (pH 9,0). Два типа НДФазы обнаружены в головном моз

ге крыс [5]. НДФаза L-типа проявляла свойства, характерные для фер

мента из микросом печени; НДФаза В-типа имела более низкие вели

чины Кт , молекулярной массы (60-75 кДа), ингибировалась АТФ и

катализировала дефосфорилирование ТДФ с высокой скоростью как

при pH 9,0, так и при нейтральных значениях pH (рН-оптимум 7,4).

Фермент со свойствами, аналогичными НДФазе В-типа, локализован в

аппарате Гольджи клеток печени крыс [6].

Ранее мы показали, что НДФазная и ТДФазная активности мем

бранной фракции из почек быка проявляют различные pH оптимумы в

щелочных условиях, которые равны соответственно 8,9 и 10,0. В на

стоящей работе нами установлено, что данные активности принадлежат

двум различным ферментам.

Солюбилизацию мембраных белков осуществляли 1% раствором

дезоксихолата Na в 50 мМ трис-HCl буфере, pH 7,5, включавшем 50

мМ NaCl, 0,2 мМ ЭДТА, 0,1 мМ феттметилсульфонилфторид и 1

мг/мл иодацетамид. Солюбилизат фракционировали сульфатом аммо

ния. Осадок, полученный при степени насыщения 30-55%, в котором

находилось основное количество ТДФазной активности растворяли в

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека