163 / 220
Зоотехния
163
УДК 577.152.3
Русина И.М. - ИБХ НАНБ
ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ БЕЛКА С
ТИАМИНМОНОФОСФАТАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ В
МЕМБРАНАХ ПОЧЕК БЫКА
Тиаминмонофосфат (ТМФ) - присутствует в различных органах и
тканях млекопитающих в количествах 0,38-2,78 нмоль/г ткани, что со
ставляет 5,9-11% от общего содержания тиамина [1]. В организме жи
вотных ТМФ образуется в реакции гидролиза тиаминдифосфата - ко
фактора ферментных систем углеводного обмена. Является ли ТМФ
просто промежуточным продуктом деградации коферментной формы
или ему отведена более существенная биохимическая роль в процессах
жизнедеятельности клетки остается неизвестным.
Дефосфорилирование ТМФ катализируется тиаминмонофосфата-
зой (ТМФаза). В гомогенатах тканей головного и спинного мозга, пе
чени и почках мышей ТМФазная активность регистрировалась в широ
ком диапазоне значений pH, проявляя два выраженных оптимума при
pH 5,5 и 9,5 [2]. Био- и гистохимические исследования выявили лока
лизацию активности в мембранных структурах клетки [2,3].
Цель данной работы заключалась в исследовании свойств фермен
та катализирующего гидролиз ТМФ в мембранах почек быка. Для по
лучения мембран образцы ткани почек гомогенизировали в 0,05 М трис
НС1 буфере, pH 7,3, содержащем 0,15М КС1, 0,2 мМ ЭДТА, и центри
фугировали при 105000g в течение 1 часа. ТМФазную активность оп
ределяли по количеству образующегося в реакции неорганического
фосфата [4].
Исследование pH-зависимости показало, что для ТМФазной реак
ции характерны два оптимума - высокий при pH 10,0 и менее выра
женный при pH 6,0. Удельная активность фермента в условиях щелоч
ного pH-оптимума составляла 35-42 нмоль/мин/мг белка.
ТМФаза представляет собой металлнезависимый фермент. При
сутствие ионов Mg2+ не оказывало влияния на фосфатазную актив
ность, катионы Са2+ снижали скорость реакции на 25%, Мп2+ ингиби
ровал ТМФазу в два раза.
Тиаминмонофосфатазная реакция подчинялась классической ки
нетике Михаэлиса-Ментен в диапазоне концентраций субстрата 0,2-
Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека