ЭлБиб

330 / 592

СОМАТИЧЕСКАЯ ГИ БРИДИ ЗАЦИЯ
СТРАТЕГИЯУЛУЧШЕНИЯКУЛЬТУРНЫХ РАСТЕНИЙ ПУТЕМ
ПЕРЕНОСА ГЕНОВ ТУБУЛИНА, СООБЩАЮЩИХУСТОЙЧИВОСТЬ К
ГЕРБИЦИДАМ - РАЗРУШИТЕЛЯММИТОЗА
Емец А., Кундельчук О., Солод ушко В., Смертенко А., Блюм Я.Б.
Ин-т клет. биол. и генет. инженерии НАНУ, ул. акад. Заболотного, 148 , Киев-
143, 252143, Украина ;
Гербицид устойчивые растения представляют собой один из первых
коммерческих продуктов сельскохозяйственного рынка, полученных
биотехнологическим путем. Ранее нами были отсеселектированы in vitro
мутанты N ic o tia n s p lum ba g in ifo fia , устойчивые к гербицидам с
антимикротрубочковой активностью - амипрофосметилу, АПМ,
(фосфороамидат) и трифлюралину, ТФЛ, (динитроанилин). Эти линии
являются ядерными мутантами с измененным Ϧ-тубулином,
обеспечивающим устойчивость микротрубочек либо к АПМ, либоТФЛ:
Впоследствии мы попытались перенести эту черту устойчивости в другие
виды S o fa n a c e a e путем асимметричной гибридизации. В качестве
реципиентов при слиянии с мутантным материалом в межвидовой и
межтрибной комбинациях использовали мезофильные протопласты
N .sylvestris и A. belladonna. Перед слиянием протопластыдоноры облучали.
После соответствующей селекции продуктов слияния получали ряд АПМ- и
ТФЛ-устойчивых клонов N.plumbaginifolia + N .sylvestris и N .plumbaginifolia +
A . b ella d on n a . Регенерированные клоны в этих комбинациях имели
фенотипические признаки реципиентов. Цитогенетический анализ
хромосомных наборов гибридов подтвердил их высокоасимметричную
природу. С помощью иммунофлуоресцентной микроскопии было показано,
что интерфазные и митотические построения микротрубочек гибридных
протопластов не разрушаются после обработки АПМ или ТФЛ (как и в случае
мутантов). Результаты двумерного электрофореза свидетельствуют, что как
АПМ-, так и ТФЛ-устойчивые гибриды экспрессируют мутантные изоформы
b-тубулина, характерные для соответствующих родителей. Показано, что
очищенный из г ибридов тубулин связывает гербициды в меньшей степени,
чем тубулин из дикого типа N. plumbaginifolia. Устойчивость к АПМ и ТФЛ
наследуется в F1. Эти результаты позволяют предполагать, что полученные
гибриды унаследовали измененные гены b-тубулина от мутантов
N. plumbaginifolia .
Таким образом, поскольку эти мутантные гены тубулина еще не
изолированы, асимметричная гибридизация может быть использована для
их переноса в другие виды культивируемых растений. Сейчас нами
осуществляются эксперименты по переносу аналогичного признака от
природного динотроанилин-устойчивого биотипа E leu sin e indica,
экспрессирующего мутантную изоформу тубулина, в другие виды
однодольных. В качестве альтернативного пути мы планируем также
идентифицировать и клонировать мутантные гены тубулина из
N.plumbaginifolia для использования их в генетической трансформации
растений. ззо
Научная электронная библиотека ЦНСХБ