ЭлБиб

292 / 592

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ, СОМАТИЧЕСКАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ
РАЗРАБОТКАМЕТОДОВРЕГЕНЕРАЦИИИГЕНЕТИЧЕСКОЙ
ТРАНСФОРМАЦИИРАСТЕНИЙRHAPONTICUMCARTHAMOIDES
Орлова И.В., *Семенюк Е.Г., Захарченко Н.С., БурьяновЯ.И.
Филиал института биоорганическай химии им. М .М . Шемякина,
Ю.А.Овчинникова РАН, г.Пущино, Московская обл., 142292
*Пущинский государственныйуниверситет, E-Mail:
Разработана система регенерации из листовых эксплантов и
проведена генетическая трансформация ценного лекарственного
растения R h a p o n tic u m c a r th a m o id e s (W illd.)Jijln . - продуцента
экдистероидов.
Система регенерации Rh. carthamoides из листовых эксплантов
включала прекультивирование на среде Мурасиге-Скуга (MS),
содержащей 1мг/л дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4 Д) и 1мг/л
бензиламинопурина (БАП) в течение 5 - 7 суток для индукции
каллусогенеза и субкультивирование на среде для регенерации с 0,5
мг/л индолилуксусной кислоты (ИУК) и 0,5 мг/л БАП. При этом сроки
начала каллусогенеза составили 17-19 дней, регенерации 22 - 25 дней.
Частота регенерации составила 47 -57%. Полученные регенеранты
укоренялись на среде MS без гормонов.
Для трансформации были использованы штаммы Agrobacterium
tum efa c ien s LBA 4301-ME (pUCD2614) и LBA 4404-ME (pAL4404),
содержащие плазмиду pGA 482::M-Eco Rll, с геном бактериальной
метилазы Eco Rll под контролем 35S CaMV промотора и штамм Аg.
tumefaciens 3101 (pPM90RK), содержащий плазмиду pPCV002, с геном
го/ С под контролем 35S CaMV промотора. В качестве селективного
маркера для растений во всех случаях использовался ген n p t-II
(неомицинфосфотрансферазы).
Получен ряд регенерантов, культивируемых на среде, содержащей
50 мг/л канамицина (для контрольных растений данная концентрация
антибиотика оказалась критической). Проводится молекулярно -
генетический анализ полученных регенерантов.
Трансформированные растения будут использованы для оценки
влияния экспрессии гена бактериальной метилазы и го/ С гена на синтез
экдистероидов.
2 9 2
Научная электронная библиотека ЦНСХБ