ЭлБиб

упрощена, исключена многоступенчатая очистка с применением хлоро-

форма; для всех операций протокола характерны простота и оператив-

ность.

Результаты электрофореза экстрактов, полученных в разных вари-

антах, показали больший количественный выход и лучшее качество

ДНК при использовании навески из средней части проростка, незначи-

тельно превышающей рекомендованный производителем вес в 30 мг,

после выдерживания растительной ткани в морозильной камере от полу-

тора до трех часов. Однако, даже при соблюдении этих условий, ДНК,

выделенная методом балк

анализа, уступала по качеству и количеству

полученной из отдельных генотипов каждого сортообразца, что требует

дальнейших исследований по оптимизации применяемого протокола.

Задача оценки генетической изменчивости и идентификации сор-

тов, популяций и форм может быть успешно решена только при выборе

эффективных молекулярных маркеров, позволяющих выявлять высокий

уровень полиморфизма ДНК, анализировать большую часть генома, по-

лучать четко воспроизводимые результаты. Для наших исследований

был выбран микросателлитный

SSR-

анализ, как один из наиболее дос-

тупных, быстрых, воспроизводимых и не требующих использования ра-

диоактивных меток. Микросателлиты состоят из участков ДНК длиной

в две–шесть пар оснований, распространенных в тандемных повторно-

стях по всему эукариотическому геному. Они имеют относительно ма-

лые размеры и могут легко амплифицироваться в процессе ПЦР. Про-

дукты амплификации выявляются с использованием как полиакрила-

мидного, так и агарозного электрофореза.

SSR-

маркеры предпочтитель-

ны для анализа и скрининга биоразнообразия разных видов, что обу-

словлено их гипервариабельностью (имеют десятки аллелей по одному

локусу, отличающихся по числу повторов).

Для повышения достоверности и результативности оценки гене-

тических особенностей исследуемого материала важна не только при-

меняемая система маркирования, но и решение проблемы адекватного

подбора праймеров. Опыт применения ДНК

маркеров показывает, что

праймеры, позволяющие различать виды, не всегда подходят для иден-

тификации внутривидового полиморфизма и наоборот.

В наших исследованиях использовались семь

SSR-

праймеров.

В выборках изучаемых образцов клевера лугового выявляли уникаль-

ные фрагменты амплифицированной ДНК, свойственные только от-

дельным образцам. Три из испытанных праймеров (42 %) позволили по-

лучить отчетливые ДНК

профили в зоне от 120 до 170 пар оснований.

Обнаружены специфичные продукты ПЦР размером 150 и 170 нуклео-

тидных пар у образцов из Чили, Бурятии и Белоцветкового с праймером

RCS

1307 (рис. 1, лунки 1, 4, 7 соответственно).

Электронная Научная СельскоХ

дио

озяйственная Библиотека