ЭлБиб

9 / 60

ученые получили положительные результа
ты при 100% ном инфицировании сортов и
селективных форм с помощью термотера
пии, но она не всегда удачно проходит. В
связи с этим поиск новых, более надежных
методов оздоровления растений актуален
и по сей день (Н.В. Катаева, Р.Г. Бутенко,
1983). Один из них — получение или реге
нерация растений из апикальной меристе
мы в стерильной культуре. Меристемные
ткани растений непрерывно поддержива
ются в эмбрионально активном состоянии
и устойчивы к генетическим изменениям
(возможно, за счет высокой активности си
стем репарации ДНК и негативной селек
ции изменившихся клеток). Для достижения
цели создания безвирусного посадочного
материала наиболее эффективно культиви
рование меристем стебля или органов
стеблевого происхождения. В трудных слу
чаях метод культуры меристем дополняют
термотерапией (E.E. Benson, 1999).
Борьба с вирусными болезнями вино
града основана на получении и размноже
нии безвирусного исходного материала . Их
диагностика требует особо сложных пред
посылок ( M.K. Razdan, E.C. Cocking, 1997).
Маточник закладывают только чистым в
сортовом и фитосанитарном отношении
посадочным материалом сортов виногра
да, включенных в районированный сорти
мент. Для получения привоев допускается
выделение специально заложенного про
изводственного виноградника, отвечаю
щего требованиям, предъявляемым к ма
точникам, и гарантирующего производство
сортового здорового безвирусного серти
фицированного посадочного материала
после проведения массовой и фитосани
тарной селекции (Закон Грузии о виноград
ной лозе и вине, Тбилиси, 2002 г).
Отбор безвирусного исходного материа
ла. Предназначенные для тестирования
растения должны отличаться подлинно
стью и чистосортностью без визуально оп
ределяемых симптомов болезней. Для их
поддержания одновременно с началом
тестирования необходимо начать выращи
вание окулянтов или черенков на участках,
защищенных от спонтанной инфекции. С
целью определения состояния насаждений
их трижды осматривают: весной после до
стижения побегами 40–50 см для выявле
ния симптомов мозаики, посветления жи
лок или пестролистности листьев и дефор
мации побегов; осенью перед уборкой уро
жая для выявления изменения окраски,
неравномерной спелости и деформации
ягод; поздней осенью после опадения лис
тьев для обнаружения на кустах симптомов
сдвоенности междоузлий, фасциации или
ненормальных разветвлений (R. Bovey,
J.J. Brudder, J.L. Simon, A. Jaquniet, S. Rev,
1974). При тестировании винограда на за
раженность вирусами помимо древесных
индикаторов широко применяют травяни
стые тест растения и серодиагностику.
Получение безвирусного исходного ма
териала. С этой целью используют термоте
рапию и (или) культуру меристем. Произ
водство безвирусного посадочного мате
риала начинают тестированием растений
на наличие фитопатогенов. Эту процедуру
проводят методами электронного микро
скопирования, серологической диагности
ки, с помощью растений индикаторов и др.
Визуально здоровые растения в первую
очередь проверяют на наличие возбудите
лей болезни методом тестирования с помо
щью растений индикаторов. В случае нега
тивного результата тестирование продол
жают Елиза серологическим методом, га
рантирующим отсутствие вируса, а при от
рицательном ответе растения готовы к
дальнейшим манипуляциям.
Тепличные и полевые растения перед
посадкой проверяют в лаборатории, для
чего их отрезки в течение 10 мин обраба
тывают 0,5% ным акарицидом широкого
спектра, промытого водой (Morestan
Bayer Chinomethionate), затем фунгицидом
Benlate или Nissorum концентрацией 1 г/л,
или 70% ным этанолом в течении 10 мин.
Поверхность растений в течение 2 мин
промывают 96% ным спиртом и сразу же
2,5% ным гипохлоридом кальция. При этом
желательно добавить несколько капель (4
капли/л) препарата Твин 20. После 15 ми
нутной стерилизации растения трижды
промывают дистиллированной водой и по
мещают в раствор аскорбиновой кислоты
концентрацией 100 мг/л. На наличие фи
топатогенов тестирование повторяют и при
позитивном результате растения использу
ют для первичного размножения.
В чашках Петри с питательной средой
Мурасиге и Скуга инкубируют отрезки рас
тений размером 0,2 мм при 22...23 °С,
влажности 90 % и освещении 2000 лк. Че
рез месяц их переносят в пробирки с пита
тельной средой на 16 ч и держат при
18...22 °С, освещении 3000 лк. Затем про
водят общепринятые процедуры и для про
бирочных, и полевых, и тепличных расте
ний:
для первичного статуса здоровья выяв
ляют вирусы методами Елиза, с помощью
электронной микроскопии, растений инди
каторов, а бактерии — методами инфекци
онно инфильтрационным Клемента и про
вокационным;
при негативном результате отрезок ме
ристемы размером 0,1–0,2 мм вводят в
культуру и инкубируют в течение 9 недель;
в случае позитивного ответа пробироч
ные растения размножают с использова
нием термотерапии и культуры меристемы.
Термотерапию с успехом впервые про
вели в 1965 г. ( A.C. Goheen, C.F. Luhn,
W.B. Hewitt, 1965). Из растений, поражен
ных скручиванием листьев, опробковени
ем древесины и желтой мозаикой, при их
термообработке при 30 °С в течение
30–98 сут получили здоровые молодые са
женцы из укорененных верхушек побегов.
Оздоровление составило около 86 %.
Бови с соавт. (1974 г.) для термообра
ботки пораженного винограда в горшках
использовали камеры объемом 17 м3 ос
вещенностью 10 000–15 000 лк, относи
тельной влажностью воздуха 60 % при
38 °С, где в течение 15 ч при повышенной
влажности воздуха укореняли верхушки
побегов размером 1–2 см, отделенных от
обработанных растений.
Н.М. Абраменко (1980 г.) совмещала
метод термообработки винограда с культу
рой меристем. Для этого почки побегов,
выдержанные в течение 70 сут при 40 °С,
дезинфицировали и помещали на пита
тельную среду, предназначенную для куль
туры меристем. Развившиеся из почек и
давшие корни растения пересаживали в
песок или почву.
Сегодня термообработке при 38 °С под
вергают укорененные в горшках саженцы.
Верхушки обработанных растений разме
ром 1–1,5 см прививают на здоровое рас
тение. Горшки находятся под колпаком 2
недели при освещенности 3000 лк, относи
тельной влажности воздуха 50 % и его по
стоянной циркуляции. Во избежание раз
вития хлороза листьев целесообразно
каждую неделю опрыскивать их 0,5% ным
раствором сульфата железа, цинка и маг
ния. Чувствительность вирусов к термооб
работке и их толерантность зависят от сор
та растения хозяина.
Культуру меристем можно использовать
и для стерильного размножения виногра
да. Для этого срезы меристем 0,2–0,4 мм
стерилизуют 0,1% ным раствором HgCL2 в
течение 1,5 мин, промывают дистиллиро
ванной водой 4 раза и помещают на про
межуточную среду на 2–4 сут, после по
вторной стерилизации переносят в колбы
вместимостью 100–300 мл на среду Мура
сиге и Скуга с органическими добавками.
Через 4–6 недель выросшие отростки раз
множаются и укореняются на среде Мура
сиге и Скуга с микро и макроэлементами
(процесс укоренения начинается через 2
недели). На растениях, выращенных из
изолированных меристем, вычленяют бо
ковые почки и аналогично меристемам по
мещают в пробирки на стерильной культу
ре при 26...28 °С и освещенности 6000 лк
(фотопериод составляет 16 ч). После обра
зования корней растения выдерживают на
обеззараженном почвенном субстрате при
20...26 °С, освещенности 12 000 лк и
100% ной влажности воздуха. Таким путем
за год из одного безвирусного исходного
растения можно получить до 160 тыс. оздо
ровленных саженцев ( M. Hevin, P. Leclair,
M. Rivers, 1973).
Сохранение и размножение безвирусных
маточных растений. Исходный безвирусный
посадочный материал необходимо защи
щать от повторной инфекции. Для этого
элитные насаждения закладывают в изоли
рованной от насекомых местности на обез
зараженной, свободной от нематод почве.
Предназначенные для создания маточников
кусты следует выращивать в условиях, иден
тичных для возделывания элитных насажде
ний (теплица на солнечном обогреве или
марлевая), и регулярно обрабатывать сис
темными инсектицидами. Участки, предназ
наченные для размещения маточников,
проблемы отрасли !
Виноделие и
иноградарство 3/2006 7
Электр нная Научная СельскоХозяйственная Библиотека