310 / 512
Таблица 1
Результаты сравнительных серологических, гематологических и ПЦР
______
методов исследований крови коров
____________
Группы
животн
ЫХ ;
Кол
,.
f
во
кор
он
ИФА
ПЦР
(+)
о
<+)
(-)
Кол-во
коров
%
Кол-во
коров
% Кол-во
коров
%
Кол-во
коров
%
Больны
е
13
13
100
-
-
13.
100
-
•
РИ Д (+)
51
51
100
-
-
32 62,7 19 37,3
РИ Д (-)
56
6
10,7
50
89,3
5
8,9
51
91,1
Как видно из таблицы, при исследовании больных лейкозом коров (пер
вая группа) и в ИФА, и в ПЦР были получены положительные результаты в
100 % случаев, что подтверждает наличие вируса и антител против него в
сыворотке и крови животных.
Результаты относительно ИФА (во второй и третьей группах) свидетель
ствуют о том, что ИФА является более чувствительным, чем РИД методом.
По литературным данным, с помощью ИФА можно выявлять антитела в
разведении более чем 1:131000— 1*.220000 [5].
Из 51 животного второй группы только 32 дали положительные резуль
таты в ПЦР. На наш взгляд, этот факт можно объяснить рядом причин: спе
цифичность и чувствительность ПЦР анализа зависят от параметров ампли
фикации, используемой пластиковой посуды, соблюдения определенных
мер предосторожности при проведении ПЦР, качества подготовки клини
ческого материала и качества тест-систем. Последнее определяется каче
ством используемой воды, термостабильной ДНК-полимеразы, а также
праймеров — степенью гомологии олигонуклеотидов. Степень гомологии
праймеров является ключевым параметром, определяющим специфичность
и чувствительность ПЦР. Выбор праймеров из консервативных участков
BLV с высокой степенью гомологии очень важен.
Геном ретровирусов, в том числе и ВЛКРС, может существовать в раз
личных формах: РНК в вирусных частицах; йровирусная ДНК в геноме кле
ток; неинтегрированная ДНК в ядре и цитоплазме; РНК-транскрипты в клет
ке. ВЛКРС можно диагностировать при обнаружении РНК вируса в плазме и
сыворотке крови, а также ДНК-копйи вируса в лимфоцитах (выявление ВЛКРС
в форме ДНК является универсальным, поскольку после захвата вирионов
лимфоцитами сразу синтезируется ДНК-копия генома ВЛКРС). Для этого
широко применяют ПЦР. При рутинном использовании ПЦР-диагностики
возникают сложности в интерпретации результатов, так как совпадение дан-
ныхИФА, РИД и ПЦР-анализа по выявлениюДНК ВЛКРС составляет 60— 100
%, а для РНК— 60 % [S.Dubeetal., 1997; Р. Kubisetal., 1996].
Компьютерный анализ тест-систем для выявления ВЛКРС посредством
ПЦР показал, что применяемые в разных лабораториях праймеры характе
307
Научная электронная библиотека ЦНСХБ