ЭлБиб

С целью проведения анализов на вариабельность и поиска

консервативных участков, необходимых для выбора праймеров,

сделали выравнивание отобранных нуклеотидных последователь

ностей с помощью системы ClastaiW Multi Sequnce Alignment.

Специфичность праймеров изучили с помощью компьютер

ных программ FASTA и BLASTA on line. При этом была установ

лена гомология выбранных олигонуклеотидов только с ошр ге

ном и не обнаружено их значимой гомологии с нуклеотидными

последовательностями других бактерий, вирусов или последова

тельностями эукариот.

В процессе дальнейших исследований были оптимизирова

ны условия проведения ПЦР и определена чувствительность ме

тода. Для этого использовали препараты ДНК, выделенной из

разного количества микробных .клеток Campylobacter jejuni

штамма № 702Т. Положительный результат был зарегистрирован

при исследовании препарата ДНК, выделенной из примерно 10

микробных клеток.

Проверку специфичности и чувствительности ПЦР тест-

системы провели путем исследования проб физиологического

раствора, молока и крови, контаминированных культурами кам-

пилобактеров подвидов fetus штамма №5396, venerealis -

№1123, jejuni ~ №702Т и bubulus - №53103, культурами

Brucella abortus, Yersinia enterocolitica и биологического матери

ала - проб печени и селезенки морских свинок, инфицированных

культурами кампилобактеров подвидов fetus, venerealis, bubulus и

jejuni. Наличие ДНК кампилобактеров было выявлено только в

пробах, контаминированных кампилобактерами подвида jejuni.

В 1999 году в соответствии с приказом Департамента вете

ринарии Минсельхозпрода РФ была проведена межведомствен

ная комиссионная апробация данной тест-системы с использова

нием стандартной панели из 28 образцов исследуемого материа

ла. Положительные результаты были зарегистрированы при ис

следовании образцов чистых культур кампилобактерий подвида

jejuni штаммов №№ 4, 702Т и 11168, проб селезенки и печени

морских свинок, инфицированных культурой штамма №702Т и

проб сыворотки крови крупного рогатого скота с содержанием

105, 104 и 103 микробных клеток штамма №702Т. При исследо

вании образцов культур кампилобактерий подвида fetus,

venerealis, bubulus, биологического материала от животных, ин

фицированных культурами штаммов данных подвидов, культур

бактерий рода Salmonella, Yersinia и Brucella, получены отрица

тельные результаты.

По результатам апробации сделано заключение о том, что ПЦР

тест-система имеет высокую специфичность и чувствительность, за

329

Научная электронная библиотека ЦНСХБ