ЭлБиб

Конъюгирование МА с пероксидазой проводили по модифи

цированному периодатному методу Tijssen.

Определение полипептидной специфичности МА проводили

методом радиоиммунопреципитации (РИП) по Appleton et al.

Оптимальная схема иммунизации мышей линии Balb/ с -

доноров спленоцитов при получении вируснейтрализующих и

антигемагглютинирующих МА отличалась введением антигена

под капсулу селезенки, что вызывало увеличение титра сыворо

точных антител к гемагглютинирующим эпитопам этого вируса в

десять раз, при увеличении титра преципитирующих антител

(РДП) и общего пула вирусспецифических антител (непрямой

ТФ ИФА) “ только вдвое.

При скрининге вируснейтрализующих МА микровариантом

экспресс-метода PH обнаружили два клона гибридом (Бт

Бт15), секретирующих МА, нейтрализующие инфекционную ак

тивность вируса КЛО 16 серотипа в титре 1:16 и 1:8 соответст

венно. При проверке активности этих МА в РЗГА установили,

что оба клона обладают способностью задерживать агглютинацию

эритроцитов морской свинки вирусом блютанга 16 серотипа в титре

1:64 и 1:16 соответственно. Оба вида МА обладали специфично

стью к антигенным детерминантам, расположенным на белке на

ружного капсида VP-2 (98кД) вируса блютанга (данные РИП).

На основе полученных иммунореагентов нами разработан

сэндвич-метод ТФ ИФА для обнаружения типоспецифических

антигенов вируса блютанга.

Проверка чувствительности и специфичности разработанно

го сэндвич-метода ТФ ИФА показала, что при сенсибилизации

твердой фазы МА клона Бт8.2. или Бт15.2 и использовании для

выявления связавшегося антигена пероксидазного конъюгата

специфических поликлональных антител метод позволяет обна

ружить типоспецифический антиген вируса блютанга в пробах

крови в титре 1:8-1:32; а также в концентрированных культу

ральных препаратах и неконцентрированных культуральных

жидкостях (в количестве от 10

ТЦД50/см3).

В результате проведенных исследований разработаны схе

мы получения МА к типоспецифическим антигенам различных

серотипов вируса блютанга и на их основе разработан сэндвич-

метод ТФ ИФА для типирования изолятов вируса блютанга, не

требующий предварительного вирусвыделения.

214

Научная электронная библиотека ЦНСХБ