ЭлБиб

позволяющей методами ИФА обнаружить антигенные детерми

нанты вируса блютанга, определяющие его серотип и играющие

основную роль в индуцировании протективного гуморального им

мунитета, непосредственно в крови и органах инфицированных

животных, минуя процедуру вирусвыделения.

На первом этапе исследований перед нами стояла задача:

разработать методы получения вируснейтрализующих МА. Вы

бор конкретного серотипа вируса блютанга в нашей работе был

обусловлен эпизоотической ситуацией в РФ. В работе был ис

пользован серотип 16 шт. "Тапхар" вируса блютанга, выделенный

в 1993 г. при вспышке блютанга среди овец в Забайкалье РФ.

Работу по получению линий гибридом, стабильно секрети-

рующих МА требуемой специфичности, проводили в следующем

порядке:

приготовление очищенного антигенного препарата ВБ с

максимальным сохранением поверхностных антигенных струк

тур, обусловливающих нейтрализацию вируса и его гемагглюти-

нирующую активность, и иммунизация таким препаратом мы

шей-доноров спленоцитов;

получение гибридных клеток путем гибридизации спленоци

тов иммунных мышей с клетками мышиной миеломной линии;

- определение специфической секреции гибридом в PH и

РЗГА;

- получение препаративных количеств МА в виде асцитиче

ских жидкостей, их очистка и конъюгирование с пероксидазой;

~ разработка методов твердофазного иммуноферментного

анализа (ТФ ИФА) для серотипирования изолятов ВБ.

Вирус КЛО 1, 2, 3,

, 12, 14, 16, 17 серотипов, вирус ЭГБО

серотипа (шт. "Альберта") и 2 серотипа (шт. "Нью-Джерси") и

вирус болезни Ибараки получены из лаборатории "Справочная с

музеем штаммов " ВНИИВВйМ. Указанные возбудители прошли

4 -9 пассажей на культуре клеток почки сибирского горного ко

зерога (ПСГК).

Препараты очищенного вируса блютанга для иммунизации

мышей-доноров иммунных спленоцитов получали по методике,

предложенной Vervoerd в нашей модификации.

Гибридизацию клеток проводили по методу, предложенному

Kohler

Milstein, в нашей модификации, при помощи 50%-ного

раствора ПЭГ-1500.

Клонирование гибридных клеток проводили в 0,3%-ном ага

ре по методу Gooding.

213

Научная электронная библиотека ЦНСХБ