215 / 604
т.е. обладали специфичностью к группоспецифическим антиген
ным детерминантам вируса блютанга, расположенным (по дан
ным РИП; на белке внутреннего капсида VP-9 (43 кД) данного
вируса. Нами разработаны сэндвич-метод ТФ ИФА для обнару
жения группоспецифических антигенов вируса блютанга, а так
же метод двухфазного ингибирования ТФ ИФА для обнаружения
соответствующих антител в сыворотке крови иммунных животных.
Проверка чувствительности и специфичности разработанно
го сэндвич-метода ТФ ИФА показала, что при сенсибилизации
твердой фазы МА клона 16Е11.2 и использовании для выявления
связавшегося антигена пероксидазного конъюгата МА клона
17Е2.2 метод позволяет обнаружить группоспецифические анти
гены вируса блютанга всех исследованных нами серотипов. Ис
пользование для выявления связавшегося с МА антигена перок
сидазного конъюгата специфических поликлональных антител
позволяет увеличить чувствительность метода в два - четыре
раза без изменения его специфичности. Этот метод позволяет
обнаружить группоспецифический антиген вируса блютанга в
пробах крови, печени и селезенки в титрах 1:8-1:32; 1:2-1:4 и
1 :2
соответственно, а также в концентрированных культураль
ных препаратах и неконцентрированных культуральных жидко
стях (в количестве от 10
3
ТЦД50/см3), в суспензии мозга ново
рожденных мышат, инфицированных вирусом блютанга (в титре
до 1:64). При этом метод позволяет дифференцировать антигены
вируса блютанга от антигенов близкородственных вирусов ЭГБ 1
и
2
серотипа и болезни Ибараки, африканской чумы лошадей, а
также от антигенов вирусов болезни Акабане, болезни Найроби,
лихорадки долины Рифт, чумы КРС, оспы овец и коз, контагиоз
ной плевропневмонии.
Для выявления антител к группоспецифическим антигенам
вируса блютанга нами разработан метод двухфазного ингибиро
вания ТФ ИФА. Суть метода заключается в следующем: взаимо
действие специфического антигена с антителами исследуемых
сывороток происходит в жидкой фазе. Это позволяет специфиче
ским сывороточным антителам ингибировать связывание антиге
на с МА при переносе прореагировавших образцов на твердую
фазу, сенсибилизированную этими МА. В отличие от стандарт
ного метода ингибирования, этот позволяет применять перокси-
дазные конъюгаты поликлональных специфических к вирусу
блютанга иммуноглобулинов, что повышает чувствительность
реакции.
При испытании метода двухфазного ингибирования ТФ
ИФА установили, что способностью ингибировать связывание
группоспецифического антигена с МА клонов 15Е10.2 и 16Е11.2,
211
Научная элек ронная библиотека ЦНСХБ