ЭлБиб

ВТОРИЧНЫЙ МЕТАБОЛИЗМ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ

THALICTRUMMINUS—

ПРОДУЦЕНТА

БЕРБЕРИНА

Никанорова Е.В., Юшкова Е.В., Репях С.М., Величко Н.А.

Красноярская государственная технологическая академия, 66049г. Красноярск,

пр. Мира, 82

Основной проблемой метода культуры тканей по прежнему является

низкий выход полезного продукта. Перспективным в отношении

разработки аппаратуры для культивирования растительных тканей

in vitro

является использование в качестве продуцентов культуры, выделяющие

экзометаболиты, что позволяет применить технологию непрерывного

культивирования.

В лаборатории биотехнологии КГТА получен высокопродуктивный

клон каллусной культуры Thalictaim minus (продуцента экзометаболитов),

на среде, содержащей 2,4Д (0,7 м г\л ), 6БАП (0,9 мг\л) и повышенной

концентрации пиридоксина. Содержание берберина в среде измерялось

сп е ктроф о том е триче с ким методом . С успен зионна я культура

выращивалаь на среде, без цитокининов с 2,4 Д (0,5 мг\л), и отличалась

мелкодисперсностью и наиболее быстрым ростом. Однако эти условия

не способствовали интенсивному синтезу вторичных продуктов и их

выделению . При поверхностном культивировании на агаре и на

пенополиуретане содержание берберина было выше, чем при

суспензионном культивировании и составляло 0, 54 г\л и 0,61 г\л

соответственно. Таким образом, можно заключить, что структурная

организация клеток и скорость их роста являются факторами,

определяющими активность вторичного метаболизма этих клеток.

Иммобилизация клеток на инертный носитель обеспечивает ряд

преимуществ при разработке технологии непрерывного культивирования.

Облегчаются манипуляции с клетками, появляется возможность отделять

их от среды, изменяя условия культивирования. Была разработана

методика иммобилизации клеток Т. minus из суспензионной культуры

на кубики пенополиуретана. Сравнительный анализ динамики роста и

выделения берберина в среду при культивировании суспензии и

иммобилизованных клеток показал, что иммобилизация стимулировала

вторичный синтез, хотя и несколько замедляла рост культуры. Так

им м о б и л и зо в а н ны е кле тки вы д е л я л и 0,31 г\л б е р б е ри н а , а

суспендированные 0,23г\л. Добавление в среду 6БАП дополнительно

стимулировало выделение алкалоида иммобилизованными клетками.

Выход повышался до 0,52г\л берберина.

Научная электронная библиотека ЦНСХБ