ЭлБиб

РАСТЕНИЯ, С ВО БО ДНЫ Е ОТ БО Л ЕЗН ЕЙ И М И КРО КЛ О Н А Л ЬНО Е

Р А ЗМ НО Ж Е Н И Е

ПЦР-АНАЛИЗГЕНОМАКАРТОФЕЛЯ,ДЛИТЕЛЬНО

КУЛЬТИВИРУЕМОГО

IN VITRO

ГеращенковГ.А., МардамшинА.Г.,ШарафутдиноваГ.Г.

Отдел биохимии и цитохимии Уфимского научного центра РАН, Уфа, 450054,

пр.Октября, 69. E-mail:

molgen@chembio.bashkiria.su

Проблема стабильности генома при длительном клональном

микроразмножении растений является мало изученной. ПЦР-анализ

является одним из перспективных подходов в изучении генетического

полиморфизма растительного генома. Вариантом ПЦР-анализа является

RAPD-метод, основанный на использовании произвольных праймеров.

При этом существенным моментом для детекции полиморфизма является

подбор оптимальных праймеров. Известно, что короткие олигонуклеотиды

с длиной цепи 8-12 нуклеотидов могут давать артефакты в связи с

избытком участков неспецифичного связывания. Этого недостатка

лишены протяженные генспецифичные праймеры длиной 19-30

нуклеотидов, однако выявляемый при этом полиморфизм как правило

незначителен. Поэтому праймеры с длиной цепи 15-18 нуклеотидов

являются оптимальными для подобных исследований.

Задачей настоящей работы было проведение сравнительного

анализа продуктов амплификации тотальных препаратов ДНК

пробирочных растений картофеля сорта Невский, культивируемого

vitro

в течение 9 лет, и неоздоровленных растений того же сорта.

ДН К вы деляли методом Грэхема , в RAPD -ПЦР реа кции

исполь зовали следующ ие праймеры : GAGGGTGGCGGTTCT ,

GAGGGAGAGAGGGAG , TAGGGAACGTGAGCTGGG . Продукты

амплификации фракционировали в 0,8% агарозном геле и анализировали

после окрашивания бромистым этидием. Полученные результаты

показали наличие полиморфизма у сравниваемых образцов. Это может

быть результатом соматических мутаций по некоторым локусам

исследуемого генома, возникающих при культивировании

in vitro

и/или

автоселекционных процессов, приводящих к отбору определенных

линий, отличных от исходных форм.

4 0 9

Научная элект онная библиотека ЦНСХБ