ЭлБиб

351 / 592

М ОЛ ЕКУЛЯ РНО -БИОЛОГИЧЕСКИЕ О СО БЕННОС ТИ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ
РА С ТИ ТЕЛ ЬНЫ Х КЛЕТОК IN VITRO
МОЛЕКУЛЯРНЫЙАНАЛИЗ ВАРИАБЕЛЬНОСТИ ГЕНОМА
СОМАТИЧЕСКИХГИБРИДОВ
Супрунова Т.П., *Кочиева Е.З., Лаптева М.К., Позмогова Г.Е.**,
Дорохов Д.Б.
ВНИИ селекции и семеноводства овощных культур (ВНИИССОК), Московская
обл., Россия. E-Mail
*Сельскохозяйственная академия им К.А. Тимерязева, Москва , Россия.
**Центр пБиоинженерия", РАН, Москва, Россия.
Ранее, мы использовали бы струю технологию RAPD анализа д ля геномной
идентиф икации целого ряда сортов и диких форм растений (Дорохов и Клоке 1997,
Генетика). Эту технологию мы успешно использовали для молекулярного анализа
генома сом атических гибридов: меж видовые сом атические гибриды капустны х
(И н сти тут селекции овощных, лекарственны х и пряны х растений, Кведлинбург,
Ф Р Г ); м е ж в и д о в ы е с о м а ти ч е с ки е ги б р и д ы ка р тоф е л я (И н с т и т у т с е л е кц и и
ку л ь ту р н ы х ра сте ни й , Гросс Л ю зовец, Ф Р Г); а си м м е тр и че ски е м еж ви д овы е
со м а ти че ски е гибриды том атов (И нститут клеточной биологии и генетической
и н ж е н е р и и НАНУ, Киев, Украина); м ежродовые сом атические ги б р и д ы томата
Lycopersicon и неклубненосны х видов картофеля (ВНИИ растениеводства им.
Н .И .Вавилова, Санкт-Петербург). Сравнительный молекулярный анализ партнеров
ги б р и д и з а ц и и и с о м а ти ч е с ки х ги б р и д о в, по зв о л и л в ы я в и ть зн а ч и те л ь н у ю
вариабельность их генома которая детектируется при RAPD анализе, как появление
новы х фрагментов амплиф ицированной ДНК, которые отсутствую т в родительских
геномах ("не родительские" зоны), либо как исчезновение отдельных фрагментов
родительского спектра.
Д л я более д етального исслед ования ф еномена "не р о д и те л ьски х" зон и
вы яснения природы появления или исчезновения отдельных зон в RAPD спектрах
р а с т и т е л ь н о й Д Н К , м ы п р о в е л и с е р и ю э к с п е р и м е н т о в на ф е р т и л ь н ы х
асим м етричны х соматичеких гибридах Lycopersicon esculentum Mill, и Lycopersicon
peruvianum var. dentatum Dun, и их F1 и F2 потомстве (Ratushnyak et al. 1993, MGG;
Череп и др. 1995, Генетика). Образование "не родительских" зон в RAPD спектрах
исследуемы х растений индуцировалось пятью из шести тестируемы х праймеров.
Одна из "не родительских" зон (580 п.о.), которая наблюдалась в R0 и F1, но не
детектировалась в F2 и родительских RAPD спектрах была клонирована в pGem -T
и секвенирована. А нали з структуры секвенированного ф рагм ента показал, что
больш ая часть клонированного фрагмента представлена экзоном и на основании
ска н и ро в ан и я изв естны х последовательностей в банке генов бы ла вы явлена
в ы с о ка я гом ологи я с геном катапсина В Nicotiana rustica. Р езультаты блот-
ги б р и д и за ц и и показали, что исследуемы й ф рагмент ам плиф ицированной Д Н К
гибридизуется только сам на себя и не дает сигналов гибридизации с RAPD спектрами
родительских форм и F2, тогда как при блот-гибридизации с геномной ДНК, сигнал
ги б рид изац ии присутствует во всех исследуемы х генотипах и свидетельствует
об уникальности этого фрагмента. Приводятся данные по молекулярному анализу
других зон амплифицированной ДНК. Обсуждается гипотеза о связи возникновения
не р о д и те л ь с ки х зон а м пл иф и ц и р о в а н н о й Д Н К с п р о ц е сса м и ре пар а ц и и и
рекомбинации.
351
Научная электронная библиотека ЦНСХБ