ЭлБиб

347 / 592

МОЛЕКУЛЯРНО -БИОЛОГИЧЕСКИЕ О СО БЕНН О С ТИ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ
РА С ТИ ТЕЛ ЬНЫ Х КЛЕТОК IN V ITRO
СРАВНИТЕЛЬНОЕИЗУЧЕНИЕМИТОХОНДРИАЛЬНОГОГЕНОМАИ
ИЗОФЕРМЕНТНОГО СОСТАВАЭСТЕРАЗВМОРФОГЕННОМИ
НЕМОРФОГЕННОМКАЛЛУСНЫХТКАНЯХГОРОХАПОСЕВНОГО
МардамшинА.Г., ГубайдуллинМ.И., ИштиряковаФ.А., ЗиякаеваК.Р.,
ВалиеваР.Д.
Отдел биохимии и цитохимии Уфимского научного центра РАН, 450054, Уфа, пр.
Октября, 69E-Mail:
Был проведен сравнительный анализ рестрикционных профилей
митохондриальной ДНК и изоферментного состава эстераз у 14-
месячных каллусных тканей гороха различающихся по способности к
морфогенезу. Оба типа каллусных тканей выращивали в темноте на
питательной среде Мурасиге и Скуга.
Экстракты эстераз получали растирая навески каллусных тканей в
охлажденных ступках в отношении 1:1 с экстракционным буфером,
содержащим 0.01 Мтрис - гидроксиметиламинометан, 0.25 М сахарозу,
0,005 М ЭДТА. Аскорбиновой кислотой реакцию среды доводили до pH
6,8. Гомогенат центрифугировали при 5000 об./мин. Электрофоретическое
разделение белков проводили в 7,5% полиакриламидном геле.
Относительную электрофоретическую подвижность расчитывали по
отношению к бромфеноловому синему.
Электрофоретический анализ изоферментного состава эстеразы
показал, что в двух типах каллусных тканей присутствовали семь
компонентов. Из них изоформы с относительной электрофоретической
подвиж ностью 0,5; 0,67; 0,7 обладали примерно одинаковой
активностью . Различия же по активности наблюдались между
изоформами с ОЭП 0,6; 0,8; 0,87.
М и то хо нд ри а л ь н ую ДНК вы д е л яли методом ф енольной
депротеинизации. Расщепление препаратов мтДНК рестрикционными
эндонуклеазами EcoR1, H in d i 11, Pst1 и электрофоретическое
разделение в 0,8% агарозном геле проводили общепринятым способом.
Р е стри кционны й анализ препаратов мтДНК морф о генного и
неморфогенного каллусных тканей по вышеперечисленным ферментам
не выявил различий.
347
Научная электронная библиотека ЦНСХБ