ЭлБиб

120

большими геномами, можно совершенно точно отобрать клоны, содер-

жащие интересующие исследователя гены. Такой подход порой назы-

вают «посадка на хромосому» (

chromosome landing) [368].

4.2.2.

Картирование высокого разрешения

Если полиморфные маркеры уже отобраны, то порядок их карти-

рования должен определяться поиском такого маркера, который нахо-

дится ближе всего к изучаемому гену. Обычно для этого применяют

картирование высокого разрешения, требующее анализа большого чис-

ла особей несколькими десятками маркеров (если, например, геном раз-

мером 2000 сМ скринирован 8000 маркеров, то около желаемого гена в

интервале 10 сМ можно ожидать наличие порядка 40 маркеров). Чтобы

получить разрешение меньше чем десять сантиморганид, что является

минимумом для нахождения клона, содержащего искомый ген, понадо-

бится более 3000 беккроссных особей (при условии, что с вероятностью

0,95 необходимо выявить, по крайней мере, одну рекомбинацию). Од-

ним из способов уменьшить объем работы — анализировать особи по-

пуляции только по двум маркерам, о которых известно, что они флан-

кируют ген и лишь потом, для последующего анализа с помощью дру-

гих маркеров, привлекать только те особи, о которых известно, что они

рекомбинировали. Другая стратегия основывается на анализе совокуп-

ности особей

[82]

. Она заключается в разделении особей популяции со-

гласно генотипам изучаемого локуса, с последующим анализом ДНК

отделённых друг от друга совокупностей генотипов. Уровень рекомби-

нации между маркером и желаемым геном может быть вычислен исходя

из пропорции совокупностей с профилями

которые выявляют хотя бы

один кроссовер и в которых его нет. Как только каждая совокупность

будет проанализирована серией маркеров

можно провести трехточко-

вые тесты и идентифицировать наиболее близко расположенные к гену

маркеры.

4.2.3.

Поиск необходимого гена в геномных клонах

Для скринирования библиотек с большими фрагментами геном-

ной ДНК (

YAC, BAC

или космиды) используют маркеры

наиболее тес-

но сцепленные с геном. Отобранные положительные клоны среди дру-

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека