ЭлБиб

119

4.2.

Использование маркеров для клонирования основных

(менделевских) генов

4.2.1.

Принцип позиционного клонирования

Ген с неидентифицированными мРНК или белком может быть

выделен с помощью транспозонинсерционного мутагенеза или позици-

онного клонирования. Преимуществом транспозонинсерционного мута-

генеза является способность мобильных элементов к инактивации ге-

нов, в которые они встраиваются. Если мутант найден по его фенотипи-

ческому проявлению, то ген может быть выделен с помощью мобильно-

го элемента, явившегося причиной мутации. Как правило, такое воз-

можно только для видов

у которых хозяйский генетический материал

может вызывать транспозиции мобильных элементов, как, например,

у кукурузы.

Позиционное клонирование не столь специфично, поскольку для

выделения гена использует тесно сцепленные с геном маркеры. В ис-

ходном методе или «прогулке по хромосоме»

[324]

желаемый ген полу-

чают постепенным приближением к нему с помощью скринирования

перекрывающихся друг с другом геномных клонов (космиды,

YAC,

BAC) [58, 398]

. Помимо трудностей тестирования каждого нового клона

на наличие в нем нужного гена этот подход у высших растений может

занимать значительное количество времени из

за размеров их геномов.

Даже если маркер находится на расстоянии 1 сМ от искомого гена, фи-

зически это может составлять несколько сотен или тысяч т.п.о. (тысяч

пар оснований), которые почти невозможно полностью проскриниро-

вать. «Прыжки по хромосоме»

[324]

в определенном смысле являются

усовершенствованием этого подхода, но методология поиска маркеров,

основанная на использовании

NIL

или

BSA

, совместно с точными кар-

тирующими методами, представляет собой более сильное орудие для

поиска и клонирования генов. Идея заключается в том, что на практиче-

ски изогенных линиях можно проскринировать несколько тысяч марке-

ров и найти среди них те, которые находятся на генетической дистан-

ции, соответствующей физическому размеру

YAC, BAC

или космидно-

му клонам. При скринировании библиотек с большими фрагментами

ДНК с помощью молекулярных маркеров, как минимум для видов с не-

Электронная Научная СельскоХозяйственная Библ отека