40 / 56
Ñàäîâîäñòâî è âèíîãðàäàðñòâî, ¹ 6, 2015
38
БИОТЕХНОЛОГИЯ
На основании результатов, полученных в
ходе анализа полиморфизма 1-го и 2-го ин-
тронов, для всех изученных сортов были
достоверно идентифицированы оба аллеля
S
-гена (табл. 1).
Таблица 1
Результаты идентификации аллельных комбинаций S-гена
по ДНК-маркерам PaConsI и PaConsII
Сорта
PaConsI
PaConsII
Аллели
S3
**
S1/S5 S4/S6 S2/S7/ /S9/S12 S6 S4 S9 S1/S3/ /S13
303
*
п.н. 456/462 518/ 523 419-428 577 1064 798 874-898
Краса Кубани
+
+
+
+
S1/S6
Кавказская
+
+
+
+
S3/S6
Василиса
+
+
+
+
S3/S9
Крупноплодная
+
+
+
S5/S9
Анонс
+
+
+
S5/S9
* –
указан размер фрагмента амплификации и аллели
(**), идентифицируемые при данном размере фрагмента
Для подтверждения результатов иденти-
фикации аллелей по консенсусным маркерам
была проведена аллель-специфическая ПЦР
по аллелям S2, S3, S5 и S6. На рис. 2 пред-
ставлены результаты электрофореза продук-
тов ПЦР с аллель-специфичным маркером по
S3-аллели некоторых сортов черешни. Дан-
ный аллель был идентифицирован на первом
этапе работы с использованием консенсусных
праймерных пар у сортов Кавказская и Васи-
лиса (рис. 3, №№ 2 и 7 соответственно).
Использование аллель-специфичного ДНК-
маркера позволило подтвердить достоверность
данных, получаемых с использованием консен-
сусных праймерных пар.
M 1 2 3 4 5 6 7 8 M
Рис. 2. Результаты аллель-специфичной ПЦР по аллели S3 у отечественных сортов черешни
(где М – маркер молекулярной массы ДНК; 1-9 сорта: 1 – Ван (сорт-стандарт); 2 – Кавказская;
3 – Деметра; 4 – Волшебница; 5 – Сашенька; 6 – Черные глаза; 7 – Василиса; 8 – Рубиновая Кубани)
На электрофореграмме видно, что у всех сор-
тов визуализируется фрагмент одинаковой моле-
кулярной массы с сортом-стандартом Ван, кото-
рый несет данный аллель. Это свидетельствует о
наличии у изученных сортов искомого аллеля.
ДНК-анализ сортов по аллель-специфич-
ным ДНК маркерам для аллелей S2, S3, S5 и S6
подтвердил результаты идентификации алле-
лей, полученные с применением консенсусных
праймерных пар PaConsI и PaConsII. Это сви-
детельствует о достоверности данных, получа-
емых с использованием обоих типов маркеров.
Следующим этапом исследования было
проведение опыления в четырех комбинациях
Электронная Научная СельскоХозяйственная Библиотека