35 / 46
М 04–38–2004 (1) возник ряд вопросов
методического характера, требующих своего
разрешения.
Целью наших исследований было:
во-первых,
показать
необходимость
соблюдения
соотношения
гид-
ролизующего агента к гидролизуемому
белку (сырому протеину) для более полного
выхода аминокислот при гидролизе;
во-вторых, разработать условия анализа
гидролизата кормов для оп-ределения
в них доли метионина, оптимально
приближенного к истинному содержанию
в анализируемом объекте.
1.
Методика
фирмы
«Люмэкс»
рекомендует 100 мг навеску пробы для
гидролиза 10 мл 6Н ΗСl в течение 16
часов при 110о С без учёта белковости
образцов, то есть без учёта соотношения
гидролизующего агента к гидролизуемому
протеину. С середины прошлого века и до
сих пор гидро-лиз 6Н ΗСl действительно
принят и используется наиболее широко при
изучении аминокислотного состава белков.
К небольшой навеске гидроли-зуемого
белка (1-10 мг) добавляют 200-500 – кратное
количество 6Н ΗСl. При этом подчёркивается,
что чемшире отношение кислоты к белку, тем
меньше потерь аминокислот при гидролизе.
В присутствии углеводов рекомендуют
увеличивать объём кислоты до 10000–
кратного по отношению к навеске белка.
Разумеется, при массовых анализах такие
условия непригодны. На практике наиболее
часто используют для гидролиза отношение
кислоты к белку от 500 : 1 до 1000 : 1 (2, 3).
Методика фирмы «Люмэкс» предусматривает
массу навески 100 мг для любых образцов.
Это
правомерно
для
низкобелковых
образцов, таких как зерно злаковых культур,
зелёная масса кормовых растений, образцы
объёмистых кормов и т.п., так как отношение
кислоты к белку будет > 500. При анализе
высокобелковых проб также необходимо
соблюдать широкое отношение кислоты к
массе гидролизуемого белка для уменьшения
Таблица 1
Содержание незаменимых аминокислот в гидролизатах проб подсолнечникового и сое-
вого шротов, рыбной муки при разном соотношении гидролизуещего агента к гидролизуемому
белку (среднее по 5 образцам), г/кг воздушно-сухого вещества
Протеин и его
характеристика
Подсолнечнико-
вый шрот
Соевый шрот
Рыбная мука
навеска образца,
мг
навеска образца,
мг
навеска образца,
мг
100
40
100
40
100
20
Сырой протеин, %
34,7
34,7
43,7
43,7 61,4 61,4
Гидролизуемый СП, мг
34,7
13,9
43,7
17,5 61,4 12,3
Отношение 6НΗСl : СП
288
719
228
571
163 813
Треонин
11,54 12,14 18,75 17,99 17,41 21,92
Валин
16,12 16,22 22,45 20,24 42,19 64,43
Метионин
2,40
4,13
2,21
3,08 2,19 5,06
Изолейцин
10,69 11,74 15,46 16,31 14,49 18,06
Лейцин
21,80 21,65 37,42 36,26 33,57 40,16
Тирозин
6,29
6,52 14,50 16,05 11,26 10,22
Фенилаланин
15,24 12,99 20,13 21,08 17,44 19,99
Лизин
12,21 12,55 29,19 28,34 36,71 46,00
Аргинин
21,33 24,59 30,05 32,06 42,65 45,63
36
Электронная Научная СельскоХозяйственная Биб иотека