ЭлБиб

87 / 592

ТО Т И П О Т Е Н Т Н О С Т Ь И М О РФ О Г Е Н Е З РА С ТИ Т ЕЛ ЬНЫ Х КЛЕТОК IN V IT R O
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫЙСОМАТИЧЕСКИЙЭМБРИОГЕНЕЗИ
РЕГЕНЕРАЦИЯДИНИТРОАНИЛИН-УСГОЙЧИВЫХБИОТИПОВ
ELEUSINEINDICA
Емец А.И., Климкина Л.А., Тарасенко Л.В., Блюм Д Б .
Институт клеточной биологии и генетической инженерии НАНУ, ул.
Заболотного, 148, Киев-143,252143, Украина,
Природные мутантные биотипы и мутантные растения, полученные
искусственным путем, являются ценным материалом для применения
в биотехнологии. Существует специальный интерес к растениям,
обладающим устойчивостью к различным видам гербицидов. На
протяжении последнего десятилетия на полях Южной Каролины (США)
были обнаружены устойчивые к динитроанилиновым гербицидам (ДНГ)
биотипы сорняка Eleusine indica, возникшие в результате длительного
использования ДНГ. Недавно было установлено, что ДНГ-устойчивость
у Е. indica связана с мутацией в одном из генов а-тубулина (Baird et al.,
1996). Поскольку до сегодняшнего дня перенос мутантного генатубулина
генноинженерным путем еще не проведен из-за технических трудностей,
актуальным является получение клеточной культуры in v itro и
регенерантов Е. indica для соматической гибридизации.
В наших экспериментах были использованы семена ДНГ-
устойчивых биотипов Е. indica, любезно предоставленные Др. В.
Байардом (Ун-т Кпемсона, Южная Каролина, США). Каллус индуцировали
из зрелых зародышей, гипокотилей, корней молодых проростков и
мезофильной ткани. Для этой цели были использованы различные
питательные среды на основе солей MS (Murasige and Skoog, 1962) с 1-
2,5 мг/л 2,4-дихлорофеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) и солей N6 (Chu
et al., 1975) с 1-6 мг/л 2,4-Д, содержащих также различные органические
добавки. Было установлено, что среды N6 с 1-2 мг/л 2,4-Д, 2 мг/л глицина,
100 мг/л аспарагина, 100 мг/л гидролизата казеина являются наиболее
оптимальными для индукции каллуса. Каллус формировался только из
зрелых зародышей и гипокотилей. Для получения эмбриогенного каллуса
концентрацию 2,4-Д в средах для индукции каллусогенеза уменьшали
в 2 раза. Недифференцированный каллус культивировали на таких
средах на протяжении недели в темноте при 25°C. С помощью
гистологического анализа было установлено, что через данный
промеж уто к времени при вышеуказанных условиях происходит
формирование в каллусе эмбриоподобных структур. Для последующей
регенерации эмбриогенный каллус переносили на свет на 2-5 дня, а
затем помещали на среду MS, содержащую 1 мг/л кинетина и 0,1 мг/л
индол-3-уксусной кислоты. Укоренившиеся растения культивировали на
безгормональной среде MS. В настоящее время продолжаются
эксперименты по изолированию протопластов из мезофилла и
суспензионной культуры E.ind ica.
87
Научная электронная библиотека ЦНСХБ