ЭлБиб

КО Л Л Е КЦ И И КУ Л Ь Т У Р К Л Е Т О К И ТКА Н Е Й РАС ТЕН ИЙ ; М Е Т О Д Ы СОХРАНЕНИЯ

_________________________________________ ГЕ Н О Ф О Н Д А _________________________________________

ГЛУБОКОЕЗАМОРАЖИВАНИЕ КЛЕТОЧНЫХ СУСПЕНЗИЙ

КАРТОФЕЛЯ И ПОСЛЕДУЮЩАЯРЕГЕНЕРАЦИЯ РАСТЕНИЙ

Волкова Л.А., Попов А.С., Головкин К.А.

Институт физиологии растений им.К.А.ТимирязеваРАН, Москва,

АСХН Туркменистана, 744000, Ашгабат, Азади, 59.

В связи с задачами биотехнологической селекции картофеля

необходимо было обеспечить криосохранение клеточных культур

in vitro,

выделенных из сорта Tava. Исследовали суспензионные культуры,

которые отличались по морфологическим признакам и способности к

морфо генезу. С успензия Т -4, д ли тел ьно культивируемая во

Всероссийской Коллекции Клеток высших растений, состояла главным

образом из рыхлых агрегатов (на 88%) и не обладала морфогенетическим

потенциалом. Суспензия КТ-3 имела не более 70% рыхлых агрегатов,

но зато плотные агрегаты из мелких клеток составляли около 30%. Эта

культура также не обладала способностью к регенерации растений.

Суспензия КТ-4, полученная сравнительно недавно, состояла

преимущественно из плотных агрегатов (70%) и имела высокий уровень

морфогенеза.

Эти суспензии были подвергнуты медленному глубокому

замораживанию по нашей стандартной программе под защитой

р ас тво ро в , со с то ящ и х из са харо зы , тре га л о зы , ДМСО

(диметилсульфоксид) и бетаина. Для предварительного культивирования

в течение 5 -6 дней в питательную среду добавляли одну из аминокислот

(аспарагин, глицин или серин), либо бетаин. Клетки Т-4 после оттаивания

из жидкого азота не возобновляли рост, культура КТ-3 возобновляла

его, но спорадически, не во всех опытах. Наилучший результат был

достигнут с клеточным штаммом КТ-4 и криопротектором, включавшим

сахарозу, 10%, трегалозу, 10% и ДМСО, 7%. Выживаемость клеток

достигала 40%, после оттаивания эти культуры восстанавливали рост и

в соответствующих условиях регенерировали растения

in vitro.

Следовательно, возобновление роста клеточных штаммов картофеля

после их криосохранения и способность регенерировать растения

зависела от количества плотных агрегатов, состоящих из мелких

меристемоидных клеток.

5 1 7

Научная эл ктронная библиотека ЦНСХБ