ЭлБиб

К О Л Л Е КЦ И И КУ Л Ь Т У Р К Л Е ТО К И ТКА Н Е Й Р АС ТЕН ИЙ ; М Е Т О Д Ы СО Х Р А Н Е НИ Я

_________________________________________ ГЕ Н О Ф О Н Д А _________________________________________

СОВМЕСТНОЕПРИМЕНЕНИЕМАННИТА И АБКПРИПОДГОТОВКЕК

КРИОСОХРАНЕНИЮКЛЕТОЧНЫХШТАММОВ РАСТЕНИЙ

IN VITRO

БаскаковаО.Ю., Никишина (Корнеева) Т.В., Зоринянц С.Э., Попов А.С,

АдуеваС.М., КуликоваЛ.Н., ЖивухинаЕ.А.

Институт физиологиирастений им.К.А.Тимирязева РАН

Москва

Московский

Педагогический Государственный Университет им.В.И.Ленина.

Для криосохранения большинства длительно поддерживаемых

vitro

клеточных штаммов приходится разрабатывать способы

предварительного культивирования. Штаммы Rhs-2 и Rhs-8

Rhaponticum

carthamoides

(маралий корень, продуценты экдистероидов) в отличие

от ранее успешно криосохраненного Rhs-1 (Л.А.Волкова, А.С.Попов),

для которого достаточно было защиты одним диметилсульфоксидом

(ДМСО, 7%) и подготовка была не нужна, оказались не только менее

криоустойчивыми, но и чувствительными к ДМСО. Из 45 испытанных

криозащитных растворов наилучшей была смесь 2% ДМСО + 5%

трегалозы + 4% глицерина. Для предварительного культивирования

комбинировали в течение 7 дней одновременно 6% маннит и

АБ К , 7,5x10 -5 М. Сочетание такой подготовкй и криозащиты при

замораживании по нашей стандартной программе обеспечило

выживаемость до 44% и успешное возобновление роста штаммов Rhs-

2 и Rhs-8 после оттаивания из жидкого азота. В то же время при

предкультивировании только с маннитом без АБК выживаемость была

ниже, а совсем без подготовки - вдвое ниже и возобновить рост не

удавалось.

Однако для штамма клеток сахарной свеклы САС-2n такое же

предкультивирование оказалось безуспешным. Безуспешным было

также холодовое закаливание с повышением концентрации сахарозы в

среде и синхронизация культуры по митозам, хотя в последнем случае

был достигнут достаточно высокий уровень синхронизации и суспензия

была обогащена мелкими маловакуолизированными клетками.

Замораживание было проведено сразу после пика митозов, в фазу G1.

На этом же штамме после указанной комбинированной подготовки

применили сверхбыстрое замораживание с использованием

витрифицирующего раствора японских авторов (PVS-3). Однако,

несмотря на витрификацию раствора, выживаемость не превышала 15-

17%, в то время как при программном замораживании получали 20-

30%, но возобновления роста не достигли. Следовательно, для клеток

САС-2n, как и ранее для штаммов Ж-2 и ДМ-0,5 (Д.Н.Федоровский)

сверхбыстрое замораживание не обеспечило преимуществ по

сравнению с программным.

5 1 5

Научная элек ронная библиотека ЦНСХБ