ЭлБиб

507 / 592

ПРОИЗВОДСТВО БИОЛОГИЧЕСКИ - АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ С ПОМОЩЬЮ
________ НЕТРАДИЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИИ____________________
ВНЕКЛЕТОЧНЫЙСИНТЕЗАЙМАЛИНА
Смирнова М.Г., Кириллова Н.В., Троицкая Л.А., КомовВ.П.
С ан кт -П ет ер б ур гская химико-ф арм ацевтическая академ ия. 197376
С-Петербург,ул.проф.Попова,д. 14, E -mail:
Аймалин - индольный алкалоид монотерпеновой природы. Широкое
использование аймалина в кардиологии обусловлено его высокой
противоаритмической активностью. В тоже время сложная химическая
структура этого алкалоида существенно затрудняет его химический
син те з.В п о сл едние годы внимание исследоа телей привлекли
ферменты ,катализирующих образование алкалоидов Раувольфии, в
частности, 17-О-ацетилаймалин: ацетилэстераза (ААЭ).Этот фермент
катализирует деацетилирование ацетилаймалина с образованием
аймалина и уксусной кислоты.Оценка уровня и динамики активности
ААЭ показала, что максимальная активность фермента приходится на
15 ,45 и 70 сутки роста ткани. Выделение и очистку ААЭ проводили по
с л е д ую щ е й с х е м е : п о л у ч е н и е с у п е р н а т а н т а , вы с а л и в а н и е ,
гелфильтрация на G-150, ионообменная хроматография на DEAE-
сефацеле и СМ-сефадексе. Полученная согласно вышеуказанной схемы
ААЭ была гомогенна по данным электрофореза, имела удельную
активность 87-187 нкат/мг и степень очистки 400 раз, выход фермента
составил 30% .Экспериментальную оценку возможности получения
аймалина in vitro, с целью обогащения исходного клеточного сока
аймалином , осуществляли с использованием высокоочищенкого
препарата фермента из клеток раувольфии.Показано.что максимальная
скорость деацетилирования наблюдалась при рН=6,0 (калий фосфатный
буфер) и инкубации в течение 10 минут при 40°С. Определение
концентрации 17-о-ацетилаймалина и аймалина в супернатанте
культивируемых клеток проводили с применением качественного и
количественных (тонкослойная хроматография,ВЖХ) методов анализа.В
результате проделанной работы была показана принципиальная
возможность использования выделенных высокоочищенных препаратов
ацетилаймалинэстеразы для синтеза аймалина in vitro, прирост аймалина
в вытяжке из культуры ткани раувольфии змеиной составил 10-11%.
508
Научная электронная библиотека ЦНСХБ