ЭлБиб

РАСТЕНИЯ, С ВО БО ДНЫ Е ОТ БО Л ЕЗН ЕЙ И М И КРО КЛ О Н А Л Ь Н О Е

РАЗМ НОЖ Е Н И Е

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАРАЖЕННОСТИ КОЛЛЕКЦИИ

ПРОБИРОЧНЫХ РАСТЕНИЙ ОЗДОРОВЛЕННЫХСОРТОВ

ВИРОИДОМВЕРЕТЕНОВИДНОСТИ КЛУБНЕЙ КАРТОФЕЛЯ

Мусин С.М., Бойко В.В., Бабоша А.В.

ВНИИ картофельного хозяйства, п. КореневоМосковской обл.

Для детекции вироида использовали новый тип ДНК-зондов,

содержащие нерадиоактивную диенплатиновую метку. Образец,

содержащий суммарный препарат нуклеиновых кислот, наносили на

мембранный фильтр и фиксировали на нем.Фильтры помещали в

гибридизационный раствор с ДНК-зондом, меченым диен-Pt. ДНКзонд

гибридизовался только с диагностируемыми образцами, зараженными

вироидом. Специфический гибридный дуплекс обнаруживали методом

ИФА, для чего мембраны со связавшимся ДНК-зондом помещали в

блокирующий раствор, а затем в раствор, содержащий первичные

моноспецифические антитела к ДНК-диен-Pt. Далее, после отмывки и

блокировки, образцы инкубировали с конъюгатом вторичных антител с

щелочной фосфатазой, который связывался с первичными антителами.

Проявляющая система состояла из буфера, субстрата для фосфатазы

и красителя. В результате ферментативной реакции получался

нерастворимый продукткраситель, окрашивающий образцы, связавшие

конъюгат вторичных антител и, следовательно, зараженные вироидом.

Таким образом, в результате диагностического анализа можно было

определить зараженность образцов ВВКК, при этом интенсивность

окраски соответствовала степени зараженности. Чувствительность

определения рекомбинантной плазмиды составляла 0,1 пикограмм.

Разработанным методом проанализировали 166 депонируемых

in vitro

в Биотехнологическом центре ВНИИКХ оздоровленных сортобразцов.

Часть меристемных линий сортов, являвшихся исходным материалом

для семеноводства России, показали положительную реакцию на

вироид. Это говорит о том , что в комплексе с использованием

оздоровленных меристемных линий должны применяться традиционные

методы клонового отбора, пренебрежение которыми и явилось одной

из причин того, что в настоящее время зараженность исходных линий

ВВКК является основной причиной низкого качества семенного

картофеля в Российской Федерации.

4 4 3

Научная электронная библиотека ЦНСХБ